猪血凝性脑脊髓炎是由猪血凝性脑脊髓炎病毒（Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV）感染引起的一种急性、高度接触性传染病,该病对仔猪有较高的致死率,其危害性不容忽视。然而,到目前为止,针对PHEV感染并无安全有效的商品化疫苗和治疗药物。和厚朴酚（Honokiol,HNK）是一种联苯二酚类化合物,是植物厚朴中主要药效成分之一,可通过血脑屏障,在治疗多种神经系统疾病时有显著效果。和厚朴酚是否对PHEV感染引起的神经系统损伤有一定的防治效果,目前尚不清楚。本论文以此为切入点,开展了以下研究工作。首先,本研究以PHEV感染N2a细胞为体外感染模型,明确和厚朴酚在体外抑制PHEV复制的效果;然后以PHEV感染C57BL/6小鼠为体内感染模型,研究和厚朴酚在体内抗PHEV感染的效果。在体外实验中,首先通过细胞活性试验（CCK-8）和Western blot（WB）试验,证明和厚朴酚可有效抑制PHEV复制,药物的最佳浓度为25μM/L;通过病毒吸附和进入试验,证明和厚朴酚能显著抑制PHEV在N2a细胞上的吸附与进入。在此基础上,设计出先加入和厚朴酚后接种PHEV（模拟预防模式）、加入和厚朴酚同时接种PHEV（模拟直接杀毒模式）、先接种PHEV后加入和厚朴酚（模拟治疗模式）三种模式,用免疫印迹试验（WB）、实时荧光定量PCR（q PCR）和间接免疫荧光试验（IFA）检测PHEV含量变化。结果发现,与对照组相比,上述三种药物处理模式中PHEV的m RNA和蛋白水平表达均显著降低,IFA试验进一步证实和厚朴酚在体外能显著抑制PHEV复制。考虑到PHEV感染所致神经损伤后,使用药物进行治疗的临床意义较小,在体内实验中,本研究使用和厚朴酚用药7天后,再经滴鼻途径给小鼠接种PHEV,实验结果发现,和厚朴酚可缓解PHEV感染小鼠的神经症状,延长存活时间,具有一定的预防效果。进一步取脑组织进行病毒含量的检测,与对照组相比,发现和厚朴酚能显著抑制PHEV在m RNA和蛋白水平上的表达,且抗原分布也明显减少。综上,和厚朴酚在体内/外实验中均能抑制PHEV的复制。为了揭示和厚朴酚抗PHEV的作用机制,本研究通过药物处理正常N2a细胞,发现和厚朴酚能上调颗粒蛋白前体（PGRN）的表达。在细胞中敲除PGRN后,再进行PHEV感染和药物处理,结果发现,与对照组相比,和厚朴酚的抗PHEV效果显著降低,表明和厚朴酚的抗PHEV效果依赖于PGRN的表达。已有研究证实,PGRN缺乏可致溶酶体功能障碍。本研究经IFA检测发现,PHEV感染引起溶酶体体积增大,而和厚朴酚可修复因PHEV感染引起的溶酶体异常积聚现象,但其对溶酶体功能的影响仍需进一步探究。本课题组前期研究发现,PHEV复制与自噬有一定的相关性,为了进一步证实和厚朴酚抗PHEV的作用可能依赖于自噬或细胞自噬相关的激酶磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的表达,本研究对和厚朴酚处理的正常N2a细胞检测发现,和厚朴酚能够引起神经细胞发生自噬,利用自噬抑制剂3-MA处理细胞以及在细胞中干扰PI3K表达后,分别对LC3以及PHEV含量进行检测,发现和厚朴酚抗PHEV效果依赖于经PI3K途径诱导的细胞自噬。总之,本研究证实了和厚朴酚在体内/外均具有显著的抗PHEV作用,尤其是将该药物用于预防PHEV感染时有显著的效果,为后期临床中的广泛应用奠定了基础;同时,本研究解析了和厚朴酚的抗病毒作用与PGRN表达以及PI3K途径诱导的细胞自噬密切相关,为进一步开发抗PHEV感染的特异性靶向药物研究提供了新的思路和研究基础。