【摘 要】
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背景血管瘤和脉管畸形是临床常见病,头、颈、颌面为好发部位,严重影响着患者的颜面外观及生理功能,若合并感染、呼吸道受压等症状甚至可能对患者生命造成威胁。由于操作简便、安全性高、适用范围广等优点,脉管腔内泡沫硬化剂注射治疗已被普遍接受并应用,成为治疗血管瘤和脉管畸形的一线方法。理想的硬化剂泡沫是替代一定体积的血液,将其置换出来,完全填充管腔,从而充分地与血管内皮细胞接触,发挥药物硬化作用。聚多卡醇（P
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背景血管瘤和脉管畸形是临床常见病,头、颈、颌面为好发部位,严重影响着患者的颜面外观及生理功能,若合并感染、呼吸道受压等症状甚至可能对患者生命造成威胁。由于操作简便、安全性高、适用范围广等优点,脉管腔内泡沫硬化剂注射治疗已被普遍接受并应用,成为治疗血管瘤和脉管畸形的一线方法。理想的硬化剂泡沫是替代一定体积的血液,将其置换出来,完全填充管腔,从而充分地与血管内皮细胞接触,发挥药物硬化作用。聚多卡醇（Polidocanol,POL）是国际上最常用的一种硬化剂,可以破坏血管内皮细胞膜结构,使内皮下胶原暴露,进而引起病变血管内壁的纤维化及管腔闭锁,阻断病变部位的血流,发挥硬化作用。透明质酸（hyaluronic acid,HA）是一种天然的糖胺聚糖,作为细胞外基质的重要组成部分,HA由细胞膜合成并释放入细胞外基质中。已有研究证实,少量HA的加入可以极大提高POL泡沫的稳定性,然而HA是否会影响POL泡沫的其他性能尚未可知,且POL中加入HA的适宜剂量没有具体定值。目的探究HA对POL泡沫的血管内皮细胞杀伤能力、泡沫稳定性、血液置换能力及黏度的影响,并探索HA的最适加入剂量。方法实验一（HA对内皮细胞的影响）:选取人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）替代脉管异常细胞进行实验,培养于96孔板。在1 mL培养基中以剂量递增的方式分别加入0.05、01、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35和0.4 mL 1%HA（组Hal～Ha8）,并设置空白对照组（Hm,仅有培养基）和细胞对照组（Hc,细胞+培养基）。取100 μL HA与培养基的混合液加入96孔板中,作用于已贴壁生长的HUVECs,24小时后利用细胞增殖实验CCK-8在450 nm波长光下测定吸光度（optical density,OD）值。实验二（HA对POL细胞杀伤能力的影响）:在1 mL1%POL溶液中以剂量递增的方式分别加入 0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35 和 0.4 mL 1%HA（组 A～1）。由于泡沫在细胞实验中不易操作,用溶液代替泡沫剂型进行实验。取100 μL HA-POL混合溶液加入96孔板中,作用于已贴壁生长的HUVECs,一经全部加入立刻吸出（约1秒）,并用磷酸盐缓冲溶液（phosphate-buffered saline,PBS）反复冲洗至无HA-POL混合溶液残留。随即在显微镜下观察细胞形态并利用细胞增殖实验CCK-8在450 nm波长光下测定OD值。实验三（HA对POL泡沫稳定性的影响）:抽取1 mL混合均匀的HA-POL溶液,用Tessari法按液气比1:4在室温下制备泡沫,观察泡沫变化,并记录液体析出至原体积一半的用时,即泡沫半衰期（foam half-life time,FHT）。实验四（HA对POL泡沫血液置换能力的影响）:取2 mL制备完成的泡沫注入自制模拟血管装置中,记录泡沫所到达的最远距离（maximum displacement distance,MDD）以及随即在“管腔”中后退3 cm所需时间。实验五（HA对POL泡沫黏度的影响）:在垂直放置的直尺表面滴0.2 mL制备好的泡沫,记录其下滑1 cm所需时间。统计分析:利用SPSS 25.0软件,采用K-W检验对实验结果进行分析,P＜0.05视为差异有统计学意义。结果1.随着HA剂量的增加,组Hal～Ha8的OD值先增大后减小（P＞0.5）;2.不论HA加入剂量的多少,组A～I与空白对照组Hm的OD值均无显著差异（P=1）;3.随着HA剂量的增加,POL泡沫半衰期逐渐延长（P＜0.001）;4.随着HA剂量的增加,MDD在各组间无显著差异（P=0.966）,泡沫在“管腔”中后退3 cm用时逐渐延长（P＜0.001）;5.随着HA剂量的增加,泡沫沿直尺表面下滑1 cm用时逐渐延长（P＜0.001）。结论1.HA可以促进内皮细胞增殖,但1%POL的细胞杀伤能力更强,因此当两者同时作用于内皮细胞时,表现为瞬间的细胞裂解死亡;2.HA可显著增加POL泡沫的黏度从而提高了泡沫稳定性及血液置换能力;3.在一定范围内（1 mL POL中加入HA剂量小于等于0.4 mL）,POL中加入的HA剂量越多,泡沫性能越好。但在临床治疗中,HA的具体剂量需要依据HA的浓度、分子量及临床需求决定,无法一概而论得出某一具体的最适剂量。
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