论文部分内容阅读
基因敲除技术是研究基因功能的一种重要手段。基因敲除技术是80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是用DNA同源重组原理,用设计的基因片段代替靶基因片段,从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展,除了同源重组外,新的原理和技术也逐渐在被应用,如诱导性基因敲除技术、条件性基因敲除技术、利用随机插入片段进行基因敲除技术、反义核酸技术。
近年来,一些新技术也用于研究基因功能,RNA干扰就是其中的一种。RNAi技术是使基因表达降低,通过比较前后基因型的变化,能很方便的鉴定出基因的功能。本实验是用条件性RNAi基因敲低技术来研究小鼠软骨细胞中FGFR2对小鼠软骨发育的作用。
首先,鉴定出条件性RNAi敲低FGFR2小鼠FGFR2-RNAi和在软骨细胞特异表达Cre重组蛋白的转基因小鼠Coll2a-Cre,然后让FGFR2-RNAi小鼠和在软骨细胞特异表达Cre重组蛋白的转基因小鼠Coll2a-Cre交配,经过对后代小鼠的基因型鉴定,得到双转基因小鼠FGFR2RNAi;Coll2a-Cre,观察了雌性双转基因小鼠FGFR2RNAi;Coll2a-Cre和同窝雌性对照体重和时间的关系以及雄性双转基因小鼠FGFR2RNAi;Coll2a-Cre和同窝雄性对照体重和时间的关系,经过统计学分析,发现双转基因小鼠FGFR2RNAi;Coll2a-Cre要比同窝对照小鼠的体重要轻;并进一步分别观察了雌、雄性双转基因小鼠FGFR2RNAi;Coll2a-Cre与同窝对照小鼠的生长板宽度,并进行了统计学分析,发现双转基因小鼠FGFR2RAi;Coll2a-Cre要比同窝对照小鼠生长板的宽度要小;经过软骨细胞的体外培养,并进行FGFR2的RT-PCR分析,发现双转基因小鼠FGFR2RNAi;Coll2a-Cre软骨细胞中FGFR2mRNA相对同窝对照表达降低。上述结果提示可用条件性RNAi敲低技术降低FGFR2在软骨中的表达来观察软骨的发育情况。