论文部分内容阅读
斑马鱼(Danio rerio)是一种典型的小型热带观赏鱼。由于其具有个体小、产卵多、发育快、体外受精、胚胎透明、易于观察、饲养简便等优点,被广泛应用于发育生物学、遗传学、环境毒理学、免疫学等学科,斑马鱼也因此成为研究背景最广泛的脊椎动物模式生物之一。本文以斑马鱼为研究对象,运用组织学、毒理学及繁殖生物学等方法比较深入研究不同浓度乙醇和MT对斑马鱼成活率、生长及性腺结构的影响。采用波恩氏液固定、常规石蜡切片的方法观察斑马鱼卵巢结构及发育情况。结果表明,斑马鱼卵巢为封闭型,分为左右大致对称的一对,90日龄左右达到性成熟。成熟卵巢乳白色,卵巢内充满II-V时相的卵母细胞,80%以上体积被V时相卵母细胞所占据,与斑马鱼为典型的非同步型卵巢相适应;II时相卵母细胞染色为深紫色,III时相卵母细胞开始出现放射膜,IV时相卵母细胞卵黄迅速堆积,V时相成熟卵母细胞呈游离状态、细胞核消失。利用乙醇浓度梯度为0 ml/L(对照)、0.50 ml/L、1.00 ml/L、2.00 ml/L、4.00 ml/L、8.00 ml/L的溶液孵化受精卵及饲养稚鱼5 d,得到受精卵孵化率分别为61%、59.5%、55%、40%、17.5%、10%;稚鱼成活率分别为67.78 %、66.84 %、58.8 %、47.68 %、20.2 %、12.3 %,并在4ml/L以上组观察到独眼畸形、脊柱弯曲和死亡等现象。结果表明,0.50 ml/L的乙醇浓度对受精卵孵化率及稚鱼成活率与对照组差异不显著,因此小于等于0.50 ml/L的乙醇溶液对斑马鱼是安全剂量。大于此剂量的乙醇则对孵化率、存活率有明显影响。利用浓度梯度为0mg/L(对照)、1.00 mg/L、2.50 mg/L、5.00 mg/L、10.00 mg/L、20.00 mg/L的甲基睾酮(MT)溶液孵化受精卵及浸泡孵化后10d的稚鱼40d,孵化和饲养期间每3d采集孵化后12d以上稚鱼固定切片观察性腺发育。结果显示,受精卵组的成活率分别为34.75%、33%、31%、23%、15.75%、9.75%;雄性比分别为50.35%、56.89%、74.94%、93.61%、95.3%、0。稚鱼最晚于35 d时可以区分性别,成活率分别为74.92%、66.60%、62.15%、41.74%、24.39%、12.81%,雄性比率为49.61%、58.17%、78.23%、92.89%、98.75%、0。并随着激素浓度的增高,各组体长、体重均有所降低。由此表明MT对斑马鱼的生长活力和成活率都有明显的抑制作用;当MT剂量达到10mg/L处理鱼卵和稚鱼均会出现少量的不育个体,20 mg/L的MT为可诱导群体不育,利用MT浸泡法对斑马鱼进行全雄控制的剂量应在5~10mg/L之间。利用含MT0mg/kg(对照)、30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg、240 mg/kg、400 mg/kg的饲料饲喂60日龄及经产雌性斑马鱼30 d,并于饲喂后进行测交。结果显示,60日龄组成活率分别为95%、90%、75%、55%、35%、70%,成熟度分别为0.1074、0.0998、0.0756、0.0582、0.0386、0.0278;经产组成活率分别为100%、95%、80%、55%、40%、65%,成熟度分别为0.2247、0.1905、0.1531、0.1210、0.0275、0.0407。随着激素剂量的增加,斑马鱼的生长受到明显的抑制,但在400 mg/kg组有明显回升。MT对雌性斑马鱼产卵量、受精卵孵化率、生长活力、成活率及成熟度都有明显的抑制作用;400 mg/kg处理雌性斑马鱼30 d可产生激素阉割。经产雌性斑马鱼性腺切片观察结果表明:随着MT剂量的增加,各剂量组性腺的发育受到的抑制加深,卵巢结构变化也明显。30 mg/kg组V时相成熟卵母细胞数量减少;60 mg/kg组II时相以上卵母细胞所占面积减少为60%,120 mg/kg组开始观测到明显的卵母细胞退化过程,240 mg/kg组II时相以上卵母细胞仅占性腺内10%左右,400 mg/kg组性腺内除少量退化中的II时相卵母细胞外,其他组织已难以确认为卵巢。卵母细胞在MT作用下的退化过程:抑制卵母细胞发育——细胞核结构变化——累及细胞器——形成凋亡小体、破坏细胞膜结构——凋亡小体逸散、细胞固缩——崩解。