论文部分内容阅读
目的分析可溶性程序性死亡细胞受体-1(sPD-1)在脓毒症患者中表达的差异性,初步探讨可溶性PD-1参与脓毒症相关免疫抑制。方法采用前瞻性观察性研究方法,选择2018年6月至2018年12月入住宁夏医科大学总医院重症医学科(ICU)中的患者,依据sepsis 3.0诊断标准,分为脓毒症组29例及脓毒症休克组31例,并选取同期入住宁夏医科大学总医院ICU的普通术后未发生脓毒症的患者15例为普通手术对照组,另招募15个健康志愿者做为健康对照组。健康志愿者入组时留取外周血标本,普通手术对照组、脓毒症组及脓毒症休克组患者入住ICU24h内留取外周血标本,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测sPD-1水平,免疫散射比浊法测定免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,补体C3、C4,流式细胞术淋巴细胞免疫分析,除健康对照组外,其余三组测定动脉血气分析录入乳酸值(LAC)等实验室指标。记录患者入住ICU24h急性生理与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭(SOFA)评分。入ICU第三天及第七天再次留取脓毒症及脓毒症休克组中仍于ICU接受治疗患者的外周血标本,并测定上述各项指标。脓毒症及脓毒症休克患者随访28天生存情况,并依据生存情况分为存活组(43例)与死亡组(17例)。结果1、四组间血sPD-1、淋巴细胞亚群及免疫球蛋白水平比较(1)各组不同时相sPD-1比较:健康对照组、普通手术对照组、脓毒症组、脓毒症休克组入ICU第一天sPD-1[pg/ml,M(P25,P75)]依次为:200.51(162.14,241.26)、191.56(151.26,232.66)、261.90(191.96,421.99)、512.64(216.85,1039.41)。与健康对照组相比,普通手术对照组sPD-1无显著变化(P>0.05)。脓毒症组、脓毒症休克组sPD-1较健康对照组、普通手术对照组均显著增高(P<0.05),且与脓毒症组相比,脓毒症休克组sPD-1显著增高(P<0.05)。入ICU第三天脓毒症组、脓毒症休克组sPD-1[pg/ml,M(P25,P75)]依次为:246.41(219.82,1,3.86)、368.31(228.79,819.92)。与普通手术对照组相比,脓毒症休克组sPD1显著增高(P<0.05),脓毒症组未见明显增高;脓毒症休克显著高于脓毒症组(P<0.05)。入ICU第七天脓毒症组、脓毒症休克组sPD-1[pg/ml,M(P25,P75)]依次为:286.52(221.62,311.45)、543.03(267.27,1023.69)。与普通手术对照组相比,脓毒症休克组sPD-1仍显著增高(P<0.05),脓毒症组未见明显增高;脓毒症休克显著高于脓毒症组(P<0.05)。(2)各组不同时相淋巴细胞计数、淋巴细胞百分比、淋巴细胞亚群比较:入ICU第一天与健康对照组相比,普通手术对照组各项指标无显著变化(均P>0.05)。脓毒症及脓毒症休克组淋巴细胞计数、淋巴细胞百分比、总T淋巴细胞%显著低于健康对照组及普通手术对照组(均P<0.05)。四组间CD8+T细胞%、CD4+T细胞%及辅助/抑制T细胞比值无差异(均P>0.05)。入ICU第三天,与普通手术对照组相比,脓毒症组及脓毒症休克组淋巴细胞百分比仍显著较低(均P<0.05),但脓毒症组淋巴细胞计数已无明显变化(P>0.05),脓毒症休克组淋巴细胞计数仍低于普通手术对照组(P<0.05)。入ICU第七天,与普通手术对照组相比,脓毒症组淋巴细胞计数、淋巴细胞百分比、总T淋巴细胞%、CD8+T细胞%、CD4+T细胞%及辅助/抑制T细胞比值,各指标均无统计学差异(均P>0.05),脓毒症休克组的总T淋巴细胞%及CD8+T淋巴细胞%仍低于普通手术对照(均P<0.05),其他各指标与普通手术对照组无差异(均P>0.05)。(3)各组不同时相免疫球蛋白、补体、NK细胞比例、总B淋巴细胞比例比较:入ICU第一天与健康对照组相比,普通手术对照组各指标未见显著差异(P>0.05)。与健康对照组及普通手术对照组相比,脓毒症休克组和脓毒症组免疫球蛋白IgG、IgM均减低;补体C3仅脓毒症休克组减低(均P<0.05)。且脓毒症休克组仅补体C3显著低于脓毒症组(P<0.05),余指标两组间未见显著差异(均P>0.05)。四组间免疫球蛋白IgA、补体C4、NK细胞百分比、总B淋巴细胞百分比均无显著差异(均P>0.05)。入ICU第七天,与普通手术对照组相比,脓毒症组免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、补体C3、C4,NK细胞(%)、总B淋巴细胞(%)均未见显著差异(均P>0.05),脓毒症休克组仅免疫球蛋白IgA升高(P<0.05),其余指标与普通手术对照组已无差异(均P>0.05)。脓毒症组及脓毒症休克组各指标比较无显著差异(均P>0.05)。2、脓毒症休克组组内各指标不同时相点比较:(1)脓毒症休克组组内不同时相sPD-1、淋巴细胞计数及淋巴细胞亚群比较:脓毒症休克组入ICU第一天、第三天、第七天sPD-1[pg/ml,M(P25,P75)]依次为:445.28(198.52,857.40)、368.31(249.23,794.37)、543.03(267.27,1023.69)。各时相点比较无显著性差异(P>0.05)。脓毒症休克组入ICU第七天淋巴细胞计数及淋巴细胞百分比%均较入ICU第一天升高(均P<0.05),总T淋巴细胞%、CD4+T细胞%较入ICU第一天比较无变化(均P>0.05),CD8+T细胞%较入ICU第一天降低(18.36±2.23 VS 27.46±4.02),辅助/抑制T细胞比值升高(1.38±0.22 VS 0.86±0.11)(均P<0.05)。(2)脓毒症休克组组内不同时相免疫球蛋白、补体、NK细胞比例、总B淋巴细胞比例比较:脓毒症休克组入ICU第七天的免疫球蛋白IgG、IgA,补体C3较入ICU第一天均有升高(均P<0.05);免疫球蛋白IgM、补体C4、NK细胞比例、总B淋巴细胞比例,与入ICU第一天比较,未见显著差异(均P>0.05)。3、存活组和死亡组sPD-1、细胞免疫、体液免疫各项指标比较(1)死亡组与存活组入ICU第一天sPD-1、淋巴细胞计数、淋巴细胞百分比及淋巴细胞亚群均无显著差异(均P>0.05)。(2)存活组、死亡组组内各项指标变化:存活组入ICU一、三、七天sPD-1[pg/ml,M(P25,P75)]依次为:316.42(216.85,859.21),344.35(236.91,781.60),278.09(221.57,579.99)。存活组sPD-1水平随入住时间延长未见显著变化(P>0.05)。存活组入ICU第七天的淋巴细胞计数及淋巴细胞百分比、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、补体C3较第一天显著升高(均P<0.05)。死亡组入ICU一、三、七天sPD-1[pg/ml,M(P25,P75)]依次为:225.57(184.06,532.48),302.15(204.92,370.71),652.16(424.69,1801.39),死亡组sPD-1随入住时间延长逐渐升高,第七天显著高于第一天及第三天(均P<0.05)。死亡组内余指标组内对比未见显著差异(均P>0.05)。4、各指标的相关性分析脓毒症和脓毒症休克患者sPD-1与SOFA评分呈正相关(r值为:0.30,P<0.01)。脓毒症休克组第七天sPD-1与淋巴细胞亚群分析中辅助/抑制T细胞比值呈负相关(r值:-0.66,P<0.05)。sPD-1与淋巴细胞计数、淋巴细胞百分比、总T淋巴细胞比例%、CD4+细胞比例%、CD8+细胞比例%无明显相关性(均P>0.05)。5、预后分析:Logistic回归分析显示入ICU第一天的APACHE II评分(OR=1.17,P=0.01)是脓毒症及脓毒症休克患者死亡的独立危险因素。sPD-1对脓毒症及脓毒症休克患者28天预后的ROC曲线分析提示,入ICU第七天的sPD-1对患者28天预后有预测价值(P<0.05)。结论1、脓毒症患者外周血sPD-1表达水平和其病情严重程度有关,入ICU第七天的sPD-1可以有效预测脓毒症及脓毒症休克患者28天预后情况。2、sPD-1与T淋巴细胞辅助/抑制细胞比例失衡相关。