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当归补血汤是金元时期李东垣所创立的益气补血方剂,由黄芪和当归两味中药以5:1的比例组成,具有补气生血的功效,多用于治劳倦内伤、气血虚弱、阳浮于外之虚热证。大量研究证实口服当归补血汤可改善机体病理状态下的非特异性免疫反应,而对疫苗的免疫调节作用方面的研究报道较少,故本研究选用O型口蹄疫疫苗免疫接种正常小鼠,探究口服当归补血汤水煎剂对O型口蹄疫疫苗的免疫效果和肠道黏膜免疫功能的影响,为进一步将其开发成口服免疫增强剂提供理论参考,主要试验如下:1.口服当归补血汤对O型口蹄疫疫苗免疫调节作用的初探为评价口服当归补血汤对口蹄疫疫苗的免疫调节作用,70只昆明种小鼠随机分为7组,每组10只,即当归补血汤2 g/m L、1 g/m L、0.5 g/m L、0.25 g/m L、0.125 g/m L、0.0625 g/m L剂量组和对照组(灌胃生理盐水);灌胃剂量0.25 m L/d,连续给药5 d。末次给药后24 h,所有试验小鼠腹股沟皮下注射O型口蹄疫疫苗0.2 m L/只,2 w后加强免疫一次。分别于2免后第1、3 w颌下静脉采血分离血清,ELISA法测定各试验小鼠2免后第1、3 w血清特异性Ig G和第3 w特异性抗体亚类Ig G1、Ig G2a、Ig G2b和Ig G3含量;2免后第3 w脱颈处死小鼠,摘取脾脏和胸腺测定其脏器指数。结果显示,与对照组相比,口服当归补血汤后试验小鼠体重及胸腺和脾脏指数变化不明显,统计学比较差异不显著(P>0.05);2免后第1 w血清总Ig G含量极显著升高(P<0.01);2免后第3 w 0.5 g/m L和2 g/m L剂量组血清总抗体Ig G和抗体亚类Ig G1含量极显著升高(P<0.01),0.5 g/m L剂量组抗体亚类Ig G2a含量极显著升高(P<0.01),各剂量组Ig G2b和Ig G3含量与对照组相比无显著性变化(P>0.05)。提示,口服当归补血汤可增强O型口蹄疫疫苗的免疫效果,其中以0.5 g/m L剂量效果最优。2.口服当归补血汤对口蹄疫疫苗免疫小鼠脾脏相关淋巴因子m RNA表达水平的影响为进一步探讨口服当归补血汤对接种O型口蹄疫疫苗小鼠特异性抗体水平的调节作用机制,24只昆明种小鼠随机分为2组,每组12只,即当归补血汤0.5 g/m L剂量组和对照组(灌胃生理盐水),所有试验小鼠灌胃给药0.25 m L/d,连续给药5 d。末次给药后24 h,试验小鼠腹股沟皮下注射O型口蹄疫疫苗0.2 m L/只,2 w后加强免疫一次。2免后第3 w脱颈处死小鼠,无菌操作摘取脾脏,TRIZOL法提取脾脏总RNA,实时荧光定量PCR分析脾脏相关淋巴因子IL-4、IL-10、IFN-γ和IL-21 m RNA表达水平。结果显示,与对照组相比,口服当归补血汤可极显著上调脾脏IL-4和IL-21m RNA表达水平(P<0.01),但对脾脏IL-10和IFN-γm RNA表达水平无显著影响(P>0.05)。提示,口服当归补血汤可能通过提高O型口蹄疫疫苗免疫小鼠脾脏IL-4和IL-21的表达量,促进特异性抗体水平的生成。3.口服当归补血汤对口蹄疫疫苗免疫小鼠肠道黏膜免疫的影响为探明口服当归补血汤对接种O型口蹄疫疫苗小鼠肠道黏膜免疫的影响,24只昆明种小鼠随机分为2组,每组12只,即当归补血汤0.5 g/m L剂量组和对照组(灌胃生理盐水);所有试验小鼠灌胃给药0.25 m L/d,连续给药5 d。末次给药24 h后,试验小鼠腹股沟皮下注射O型口蹄疫疫苗0.2 m L/只,2 w后加强免疫一次。2免后第3 w脱颈处死小鼠,无菌操作摘取十二指肠,运用ELISA法检测十二指肠肠道内SIg A含量;TRIZOL法提取十二指肠总RNA,实时荧光定量PCR检测十二指肠组织中J-chain、p Ig R、BAFF、APRIL、IL-10和IFN-γ基因的m RNA表达水平;同时制备十二指肠石蜡切片,HE染色计数上皮淋巴细胞(IEL)数量、免疫组化法计数Ig A+细胞面积。结果显示,与对照组相比,口服当归补血汤后小鼠十二指肠SIg A含量极显著升高(P<0.01),显著增加Ig A+细胞面积(P<0.05),极显著上调J-chain基因的m RNA的表达水平(P<0.01),显著上调p Ig R、BAFF和IL-10基因的m RNA的表达水平(P<0.05);IEL数量无显著性差异(P>0.05)。提示,口服当归补血汤可提高O型口蹄疫疫苗免疫小鼠的肠道黏膜免疫水平。综上所述,口服当归补血汤可极显著提高O型口蹄疫免疫小鼠血清中抗口蹄疫病毒特异性抗体Ig G及其亚类Ig G1、Ig G2a水平,上调脾脏淋巴细胞因子IL-4和IL-21 m RNA的表达水平,促进十二指肠黏膜组织SIg A分泌,增加十二指肠黏膜Ig A+细胞面积,同时提高十二指肠组织中J-chain、p Ig R、BAFF和IL-10的m RNA表达水平。