大豆磷脂制备高纯度磷脂酰胆碱的研究

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本文研究了以乙醇为溶剂,大豆磷脂为原料,经乙醇萃取、乙醇冷冻结晶纯化、柱层析纯化分离制备高纯度磷脂酰胆碱(PC%≥90)的工艺技术方法,并探讨了最佳工艺条件;分析测定了不同方法制得的磷脂酰胆碱样品中的脂肪酸组成以及糖脂含量;研究了磷脂酰胆碱在氧化铝层析柱中的传质特性。研究采用单因素试验与正交试验方法考察了萃取时间、萃取温度、乙醇浓度、料液比等因素对乙醇混合萃取大豆磷脂中磷脂酰胆碱效果的影响,得到最佳工艺条件,在萃取时间30min,萃取温度35℃,乙醇浓度97.5%,料液比1:8(w/v)条件下,磷脂酰胆碱纯度达47.8%,得率为54.6%。为提高乙醇萃取磷脂酰胆碱的效率,研究还采用超声波辅助萃取的方法,探讨了乙醇萃取磷脂酰胆碱的最佳工艺条件:超声频率45KHz、超声功率300w、萃取温度30℃,料液比1:6(w:v),乙醇浓度95%,萃取时间10min,磷酯酰胆碱纯度为51.8%,得率为52.5%。实验研究了PC% 45.1的磷脂试样,在低温条件下的冷冻结晶纯化分离,通过单因素试验与正交试验得到的最佳工艺条件:料液比1:8(w/v),冷冻时间6h,冷冻温度-12℃,乙醇浓度97.5%,磷酯酰胆碱纯度为72.5%,得率为69.2%。实验以PC% 60.5磷脂试样为原料,乙醇为洗脱液,柱层析纯化分离磷脂酰胆碱的研究,重点探讨了乙醇洗脱液浓度、流速、上样量、上样浓度及固定相种类等对柱层析纯化分离磷脂酰胆碱的影响,在100~200目氧化铝为固定相、洗脱液为95%乙醇溶液、上样浓度为1:4(试样:乙醇w/v)、流速为8ml/min、负载量为0.0238g/1g的条件下,PC%≥90得率达到最高为83.68%。建立了以无醛乙醇为溶剂,碱、酸两步水解,及紫外分光光度仪测定磷脂中总糖含量的分析方法。测定了大豆浓缩磷脂、粉末磷脂、PC% 45.1(乙醇混合萃取法)、PC% 60.5(乙醇冷冻结晶纯化法)、PC%90(柱层析纯化分离法)磷脂试样中总糖含量,结果分别为3.48%、3.22%、3.52%、3.96%及迹量,结果表明柱层析纯化法可去除磷脂中的糖类成分;由糖脂组分分析知,磷脂试样中糖脂主要为单半乳糖甘二脂和单半乳糖甘一酯。实验还研究了不同磷脂酰胆碱含量的试样脂肪酸组成成分,气相色谱法测定结果表明:不同磷脂酰胆碱试样脂肪酸组成中以亚油酸为主,磷脂酰胆碱纯度与亚油酸、棕榈酸含量存在很好的线性关系。采用静态吸附法测定了磷脂酰胆碱在100~200氧化铝颗粒上的吸附等温曲线,结果表明与Freundlich等温模型吻合的最好。运用并考虑轴向扩散、液膜传质、孔内扩散等一般化工传质模型,研究了磷脂酰胆碱在氧化铝层析柱中的吸附过程;通过试验穿透曲线拟合求算出液膜传质系数与孔内扩散系数。
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