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目的：研究粘附素-5 N端CED-4基因转染人乳腺癌细胞MDA-MB-435及其对MDA-MB-435细胞增殖的影响。方法：① 用氯化钙制备感受态大肠杆菌（XL1-Blue）；② 转化感受态菌：用质粒pVSV-G , pGAG-POL, pMSCV和携带基因的CED-4pMSCV转化感受态XL1-Blue大肠杆菌。转移适量转化菌于平皿培养，筛选氨苄青霉素抗性转化菌落；③ 提取质粒和酶切质粒：用Qiagen Plasmid Purification试剂提取质粒，限制性内切酶BspH1、Bgl II、Afl II、EcoR?和BglП分别酶切pVSV-G, pGAG-POL, pMSCV, CED-4pMSCV，电泳鉴定质粒；④ 293包装细胞包装重组逆转录病毒：包装前用G418筛选293细胞，脂质体介导下分别用pVSV-G, pGAG-POL,CED-4pMSCV和pVSV-G, pGAG-POL, pMSCV转导293细胞，293细胞包装出含有目的基因CED-4和无目的基因的重组逆转录病毒；⑤ 基因转染MDA-MB-435细胞：用重组逆转录病毒转染实验组和实验对照组的MDA-MB-435细胞。增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）为基因转染阳性细胞的标记，第3天观察绿色荧光，2周后密切观察细胞的形态变化；⑥ 细胞增殖实验：MTT法检测3组细胞活性吸光度值；⑦ RT-PCR: 引物设计，提取总体RNA, PCR扩增，琼脂糖电泳检测3组细胞整合素β1的表达。结果：① 氨苄青霉<WP=4>素抗性转化菌落生长：平皿上可见菌落，pMSCV , CED-4pMSCV , pGAG-POL和pVSV-G转化菌分别有个76、20、28、30个菌落长出,而阴性对照组则未有菌落；② 质粒DNA酶切片段大小正常：酶切质粒、电泳结果表明，pVSV-G, pGAG-POL, pMSCV,CED-4pMSCV 质粒DNA大小正常；③ 293细胞产生重组逆转录病毒：质粒转入293包装细胞，24小时后，293细胞出现绿色荧光, 含有重组逆转录病毒的培养液经浓缩，感染NIH 3T3细胞，3天后，可见NIH 3T3发出绿色荧光；④ 重组逆转录病毒高效基因转染MDA-MB-435细胞： MDA-MB-435细胞于转染后的第3天，细胞出现绿色荧光, 基因转染率为97.54%；⑤ 转染的CED-4基因抑制MDA-MB-435细胞增殖：实验组细胞的吸光度值（A）低于实验对照组和空白对照组（p<0.05），而实验对照组和空白对照组细胞吸光度值无显著性差异 (p>0.05)。2周后，实验组的细胞开始收缩，并成串珠样排列，细胞间空隙增大，逐渐脱离瓶壁，成团悬浮于培养液中，细胞死亡；⑥ CED-4基因上调MDA-MB-435细胞整合素β1基因的表达：RT-PCR结果显示，实验组整合素β1表达上调，在琼脂糖凝胶电泳700 bp处，可观察到明显条带。结论：① 重组逆转录病毒高效基因转染人乳腺癌细胞MDA-MB-435；② CED-4基因抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-435的增殖；③ CED-4基因上调人乳腺癌细胞MDA-MB-435整合素β1的表达；④ CED-4基因抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-435的增殖，与整合素β1表达上调有关。