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目的:生长抑制因子4(Inhibitor of growth 4,ING4)在多种恶性肿瘤中可以通过抑制增长及促进凋亡发挥抑癌作用,本研究通过体外构建人ING4基因的重组表达质粒转染人恶性黑素瘤细胞系A875,探讨ING4基因对黑素瘤细胞凋亡的影响及其调控机制。 方法:体外培养人恶性黑素瘤细胞系A875,将携带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标签的人ING4重组表达质粒转染入人恶性黑素瘤细胞A875中,以人黑素瘤细胞A875为空白对照,以转染入空载质粒M29的人黑素瘤细胞M29-A875为阴性对照,采用蛋白印迹(Western blot)方法检测转染后的细胞表达ING4蛋白的情况;采用流式细胞术,检测各组细胞的凋亡率,采用Western blot方法检测Fas(CD95)/FasL(Fas Ligand)凋亡通路相关蛋白Fas,FasL,半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8),半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3),二磷酸腺甘核糖多聚酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的表达情况。 结果:将外源基因ING4转染入人黑素瘤细胞A875后,经Western blot法证实与未转染的黑素瘤细胞及转染空载质粒的黑素瘤细胞比较,转染后A875细胞可以高效表达ING4。经流式细胞术检测发现,转染ING4的人黑素瘤细胞凋亡率明显增高,与未转染的黑素瘤细胞及转染空载质粒的黑素瘤细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。经Western blot检测发现,转染ING4的人黑素瘤细胞呈现Fas表达上调,而FasL,caspase-8,caspase-3,PARP表达下调。 结论:ING4在体外能够促进人黑素瘤细胞A875的凋亡。ING4促进人黑素瘤细胞A875凋亡作用可能是通过对Fas/FasL凋亡通路进行调控实现的。