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目的：急性髓系白血病（AML）是一种具有异质性的血液系统恶性肿瘤。细胞遗传学是影响疾病治疗和预后的重要因素之一。表现为正常细胞遗传学的AML患者（cytogenetically normal AML, CN-AML）占全部AML患者的比例最高（大约45%），而他们具有基因异质性。针对这类患者的基因突变研究有助于辨别与治疗失败相关的遗传损伤。实验室研究表明，表观遗传学失调是一种导致AML的常见机制。PcG（Polycomb group）蛋白家族及DNA甲基化是两个涉及基因活性抑制的基本表观遗传学系统。这两个系统的异常改变会导致抑癌基因的过度沉默，从而导致恶性肿瘤的发生。EZH2（enhancer of zeste homolog2，EZH2）基因是果蝇zeste基因增强子的人类同源物，是PcG基因家族的重要成员之一。它定位于染色体的7q35，在许多恶性肿瘤组织中都高表达。作为一种PcG蛋白，EZH2蛋白是PRC2（Polycomb repressive complex2）蛋白复合物的催化亚基，而PRC2是组蛋白H3的27位赖氨酸的主要甲基化转移酶。PRC2通过组蛋白的甲基化作用，对染色质进行酶学修饰，发挥其染色质沉默作用。而这种沉默作用靶向作用于一系列决定细胞分化和周期调节的基因上。EZH2在肿瘤发生中的作用尚未完全证实，但是许多证据表明EZH2相关的表观遗传学沉默系统，在肿瘤的发生中发挥重要的作用。另一个具有特征性的表观遗传学改变是CpG岛的DNA超甲基化，通常发生于抑癌基因的启动子区域，通过超甲基化作用导致抑癌基因的失表达。DNA的甲基化正是由DNA甲基转移酶（DNMTs）所介导的。值得注意的是，全基因组范围的甲基化研究发现，在AML中存在一系列基因的启动子异常甲基化。先前也有实验表明，AML患者中甲基转移酶基因（DNMT1、DNMT3A以及DNMT3B）的表达升高。最初，PcG蛋白沉默系统与DNA甲基化被认为是两个独立的基因沉默系统。然而后来有实验表明EZH2与DNA甲基转移酶在功能和结构上存在着联系，从此揭示出了两种关键的表观遗传学沉默系统之间尚未被认识的直接联系。本实验通过测定EZH2、DNMT1、DNMT3A以及DNMT3B基因在CN-AML患者中的表达情况，分析EZH2与DNMTs之间的关系，探讨EZH2在CN-AML发病机制中可能存在的作用以及对预后的影响。方法：应用半定量逆转录-聚合酶链反应（semi-quantity reversetranscription-polymerase chain reaction, RT-PCR）方法，对78例AML患者（包括：初治组，27例；缓解组，43例；复发组，8例。其中，初治组和复发组均为CN-AML）及11例正常对照组标本，进行EZH2、DNMT1、DNMT3A以及DNMT3B的mRNA水平的检测。结果：1EZH2、DNMT1、DNMT3A以及DNMT3B mRNA在CN-AML患者中的表达1.1EZH2mRNA在初治组中的表达水平为0.151（0.465），阳性率为96.3%（26/27），在复发组中表达水平为0.511（0.451），阳性率为100%（8/8），在缓解组中水平为0（0.177），阳性率为48.8%（21/43），在正常组中水平为0.018（0.202），阳性率为54.5%（6/11）。初治组和复发组的表达水平均明显高于缓解组与正常组（P <0.05）。初治组和复发组的表达率也均较正常组明显升高（P <0.05）。其他组别之间差别没有统计学意义（P>0.05）。1.2DNMT1mRNA在初治组中的表达水平为0.499（0.31），阳性率为96.3%（26/27），在复发组中表达水平为0.502（0.581），阳性率为87.5%（7/8），在缓解组中水平为0.161（0.393），阳性率为69.8%（30/43），在正常组中水平为0.203（0.293），阳性率为72.7%（8/11）。初治组和复发组的表达水平均明显高于缓解组与正常组（P <0.05）。其他组别之间差别没有统计学意义（P>0.05）。1.3DNMT3A mRNA在初治组中的表达水平为0.722（0.934），阳性率为100%（27/27），在复发组中表达水平为0.733（0.673），阳性率为100%（8/8），在缓解组中水平为0.226（0.461），阳性率为81.4%（35/43），在正常组中水平为0.134（0.472），阳性率为90.9%（10/11）。初治组和复发组的表达水平均明显高于缓解组与正常组（P <0.05）。其他组别之间差别没有统计学意义（P>0.05）。1.4DNMT3B mRNA在初治组中的表达水平为0.071（0.387），阳性率为92.6%（25/27），在复发组中表达水平为0.18（0.536），阳性率为87.5%（7/8），在缓解组中水平为0（0.021），阳性率为39.5%（17/43），在正常组中水平为0（0.092），阳性率为45.5%（5/11）。初治组和复发组的表达水平均明显高于缓解组与正常组（P <0.05）。初治组的表达率也明显高于正常组（P <0.05）。其他组别之间差别没有统计学意义（P>0.05）。2根据对16例患者治疗前后的追踪检测，EZH2mRNA表达水平治疗前为0.151（0.72），缓解后降到0.033（0.167），DNMT1从治疗前的0.709（0.538）降到0.31（70.475），DNMT3A从0.798±0.606降到0.347±0.284，DNMT3B从0.051（0.884）降到0（0.165），这种下降趋势均有统计学意义（P <0.05）。3按照EZH2mRNA表达水平的中位数，将初治组分为高表达组（≥0.151）和低表达组。在14例高表达组中，有10例达CR，CR率为71.4%；在13例低表达组中，有10例达CR，CR率为76.9%。高表达组的CR率与低表达组相比差别没有统计学意义（P>0.05），而且两组死亡率也无差别（P>0.05）。4在初治组中，EZH2mRNA的表达水平与外周血白细胞数、骨髓CD34阳性细胞数均没有相关性（P>0.05）。5我们发现初治组中不仅三个甲基转移酶基因之间存在两两正相关性，EZH2与三个甲基转移酶基因也存在正相关（rE-D1=0.403；rE-3A=0.546；rE-3B=0.453；rD1-3A=0.439；rD1-3B=0.401；r3A-3B=0.576，P值均小于0.05）。结论：1EZH2基因在初治组和复发组的mRNA表达水平及表达率均明显高于正常组，并且在缓解后降低。而EZH2相关的组蛋白甲基化作用可导致染色质的沉默，所以EZH2的高表达及其相关的表观遗传学变化可能对CN-AML的发病起重要的作用。2我们将初治组分为EZH2mRNA高表达组和低表达组，两组的CR率和死亡率都没有明显的差异。因此，在CN-AML中我们尚且不能认定EZH2的高表达与治疗效果差以及不良预后有关，不像在其他实体肿瘤中可以作为判断预后的指标之一。3我们发现三个甲基化基因在初治组和复发组的表达水平均高于正常组，而且在初治组中不仅在三个甲基转移酶基因之间存在两两正相关性，而且EZH2与三个甲基转移酶基因也存在正相关。说明不仅DNA甲基化在CN-AML的发病中发挥着重要的作用，而且与EZH2的这种共表达关系表明在CN-AML中组蛋白甲基化与DNA甲基化可能存在功能联系，这可以为新的临床治疗方案提供一定理论依据。