皮质酮对大鼠再生肝鸟氨酸脱羧酶基因表达的调控

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以部分肝切除(partial hepatectomy,PH)诱导的雄性Sprague-Dawley大鼠(体重180~200g)再生肝为材料,在PH前3天行双侧肾上腺切除术(bilateral adrenalectomies)。不同剂量外源皮质酮分散于芝麻油中皮下注射去肾上腺大鼠,每12 h 一次,直至乙醚麻醉处死。用一步法RT-PCR与Southern blot相结合的方法定量研究了大鼠再生肝中鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)mRNA的水平,分析了皮质酮剂量与ODC基因转录活性之间的关系。为阐明糖皮质激素在大鼠肝再生中的作用及其调节机制积累资料。结果如下: (1)对定量分析ODC基因表达的一步法RT-PCR的条件进行优化,模板量为1μg肝总RNA,反转录30 min后分别对ODC mRNA和GAPDH mRNA进行25及22个循环数扩增。 (2)完整肝脏(PH 0 h)中,对照鼠(去肾上腺假手术鼠)ODC mRNA较低;肾上腺切除导致mRNA的水平升高50%;低剂量(10mg/kg体重)、中等剂量(20 mg/kg体重)和高剂量(40 mg/kg体重)外源皮质酮处理分别降低odc表达5%、7%及64%。 (3)PH诱导的再生肝中,对照组ODC mRNA水平快速升高,在3 h显著高于0 h近2倍;5 h达到峰值,几乎为0 h的3倍,随后逐渐降低;但在观察到的实验阶段仍维持高水平,极显著高于0 h(P<0.01)。 各个剂量外源皮质酮处理组ODC mRNA水平变化趋势与对照组相似。与对照组相比,低剂量、中等剂量、高剂量皮质酮处理,PH后再生肝ODC mRNA水平在3 h分别降低22%、36%、55%;在5 h分别降低17%、36%、63%;在7 h分别降低12%、38%、64%;在9 h分别降低20%、45%、69%;在12 h分别降低27%、46%、77%,均有极显著性差异(P<0.01)。而去肾上腺组在对应的时间点则分别升高:11%、13%、9%、1%、4%。 结果表明,对大鼠完整肝以及早期的再生肝,外源皮质酮和内源糖皮质激素调节ODC基因转录的方式一致,均为抑制作用,抑制程度与处理剂量呈正相关。
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