维泰醇对TRAIL诱导肾癌细胞凋亡的影响及其分子机制研究

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目的:观察TRAIL联用维泰醇后其促肾癌细胞凋亡作用的变化情况,并探究其背后可能的作用机制。方法:首先使用MTT法、流式细胞术以及western blot法分别观察ALT与TRAIL联用后细胞活性、细胞凋亡以及凋亡蛋白的变化情况。接着采用western blot法观察ALT对哪些TRAIL受体蛋白的表达产生影响,并通过MTT法及western blot法观察转染了对应受体si RNA后肾癌细胞的细胞活性及凋亡情况。为明确ALT调节TRAIL受体的机制,在通过转染si RNA和添加对应抑制剂分别实现对C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族成员的抑制后,使用MTT法及western blot法对细胞活性及对应蛋白的表达情况进行观察。最后使用western blot法观察ALT作用下抗(促)凋亡蛋白的表达情况。结果:ALT与TRAIL联用后可强化TRAIL在肾癌细胞中的促凋亡作用。在TRAIL受体中,死亡受体5(death receptor 5,DR5)是唯一受到ALT的影响而产生表达程度改变的,并且在转染DR5-si RNA抑制DR5表达后,ALT的促TRAIL效应受到明显抑制(P<0.01),表明DR5是ALT发挥促TRAIL效应中的关键一环。在转染CHOP-si RNA后,ALT作用下DR5的表达增强及TRAIL的促凋亡作用均受到明显抑制(P<0.001);而在MAPK家族中,只有当c-Jun氨基末端激酶(c-Jun Nterminal kinase,JNK)通路被抑制表达后,CHOP及DR5的表达才出现抑制(P<0.05),抑制其他通路表达对CHOP及DR5的表达并无明显影响。另外,ALT的促TRAIL效应还涉及对部分抗凋亡蛋白表达的抑制以及对部分促凋亡蛋白表达的增强。结论:ALT可强化TRAIL在肾癌细胞中的促凋亡作用,作用机制主要包括通过JNK/CHOP通路上调死亡受体DR5的表达以及对凋亡通路中部分凋亡蛋白的表达造成影响。本研究为拓展TRAIL在肾癌治疗中的应用提供了研究基础及理论支持。
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