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目的：通过研究宫颈癌患者外周血单核细胞来源的树突状细胞(dendritic cells, DCs)体外诱导、扩增方法以及生物学特性,进一步在体外研究DC在宫颈癌免疫中的作用，为DC疫苗将来应用于临床提供理论依据。方法：1．宫颈癌患者外周血树突状细胞的体外扩增和鉴定 从宫颈癌患者外周血中分离出单核细胞,在rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α作用下培养7-10天,通过形态学观察、FACS分析(检测DC表面特异性标记CD1α及DC功能相关分子HLA-DR、CD80的表达)和混合淋巴细胞反应,从形态学和结构特征、表面特异性标记及生物学活性等方面鉴定所获细胞是典型的、有活力的树突状细胞。2．负载抗原树突状细胞诱导T细胞增殖效应 制备宫颈癌患者癌组织肿瘤细胞抗原,取同一患者外周血,按前述方法诱导扩增出DC。同时以细胞因子IL-2刺激外周血分离来的异体淋巴细胞,得到T细胞。将抗原致敏DC后与T细胞共同培养,MTT法检测不同时间段抗原负载的DC刺激同源异体淋巴细胞的增殖效应。3．宫颈癌患者外周血树突状细胞抗宫颈癌免疫 负载抗原DC体<WP=8>外激活初始T淋巴细胞,产生肿瘤特异性CTL,MTT法检测比较负载抗原DC与未负载抗原DC诱导的CTL对Hela细胞和SKOV3细胞不同的杀伤效应,同时测定单纯抗原刺激下的T淋巴细胞对以上两种肿瘤细胞的非特异性杀伤作用。结果：1．宫颈癌患者外周血单核细胞来源DC的鉴定和生物学特性 联合应用细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α,刺激宫颈癌患者外周血分离而来的单核细胞,在37℃、5%CO2条件下,培养7天即可诱导出典型的DC。经光学显微镜和透射电镜观察显示,所诱导的细胞具有典型DC的形态学和结构特征；流式细胞仪分析证实所获细胞表达DC特异性表面标记CD1α,同时表达功能相关分子HLA-DR、CD80；混合淋巴细胞反应的检测表明,该细胞具有较强的刺激同种T淋巴细胞增殖的能力,具有典型DC的基本生物学特性。2．负载抗原DC诱导T细胞增殖效应 分别测定DC与T淋巴细胞共同培养24h、48h、72h、96h后的吸光度,计算刺激指数,可见负载肿瘤细胞抗原的DC能有效促进T淋巴细胞的增殖生长,与对照T淋巴细胞组和DC组比较,存在显著性差异(P<0.05)。3．宫颈癌患者外周血DC抗宫颈癌免疫 被宫颈癌细胞抗原致敏的DC,激活同源异体T淋巴细胞,生成肿瘤抗原特异性CTL,对宫颈癌Hela细胞产生高效而特异的杀伤作用(56.410%),对卵巢癌SKOV3细胞仅有一定的杀伤作用(24.901%)；而未致敏DC激活的CTL对以上两种<WP=9>肿瘤细胞只有很低的杀伤作用,分别为10.256%和20.151%。单纯肿瘤抗原刺激下的T淋巴细胞,对Hela和SKOV3细胞产生的只是非特异性杀伤作用,其效率仅为1.865%及15.613%。结论：1．宫颈癌患者外周血单核细胞在细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α的联合刺激诱导下,可以分化为典型的树突状细胞,具有典型形态学和结构特点,表达特异性表面分子,能够刺激T淋巴细胞的增殖,在抗肿瘤免疫中具有重要作用。2．源自宫颈癌患者外周血的DC,负载宫颈癌抗原后,激活产生的CTL能选择性特异性杀伤宫颈癌Hela细胞,而对卵巢癌SKOV3细胞的杀伤率较低,说明DC具有很强的抗原递呈功能。3．来自宫颈癌患者的DC诱导激活得到抗原特异性CTL,在体外能产生较强的特异性免疫反应,为DC疫苗治疗宫颈癌患者应用于临床的有效性和可行性提供了理论依据。