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第一部分MALAT1在胃癌组织中的表达与临床病理特征的关系目的:本研究验证MALAT1在胃癌组织中的表达,分析MALAT1表达与胃癌临床病理特征的关系。研究MALAT1能否作为胃癌诊断的生物学指标和治疗的潜在靶点。方法:（1）采用生物信息学数据库（GEPIA）分析MALAT1在胃癌和正常组织中表达差异。（2）qRT-PCR检测57例胃癌组织及癌旁组织中MALAT1的表达水平。（3）qRT-PCR检测116例胃癌组织中MALAT1的表达差异,并且分析胃癌中MALAT1表达与其临床病理特征的相关性。结果:（1）经公共数据库（GEPIA）分析可知,MALAT1在胃癌组织（n=408）和正常组织（n=211）的对比中,MALAT1在胃癌组织中的表达高于正常组织（P＜0.05）。（2）经qRT-PCR分析发现,与相对应的癌旁组织相比,胃癌组织中MALAT1表达水平显著增高,差异具有统计学意义（P＜0.01）。（3）MALAT1表达与胃癌肿瘤大小,浸润深度,淋巴结转移、脉管浸润和TNM分期晚正相关（P＜0.01）。结论:MALAT1在胃癌组织中高表达,且与胃癌患者临床病理特征密切相关。MALAT1可能是胃癌诊断的生物学指标和治疗的潜在靶点。第二部分 MALAT1对胃癌细胞增殖的影响目的:本研究通过对MALAT1体内和体外功能实验研究验证MALAT1对胃癌细胞增殖的影响方法:（1）通过qRT-PCR测量正常人胃上皮细胞系GES-1和人胃癌细胞系MKN45,CTC105和CTC141中MALAT1的表达水平。（2）利用针对MALAT1的siRNA以及构建的MALAT1过表达载体分别转染CTC105和CTC141细胞系,并通过qRT-PCR检测两种细胞内MALAT1的RNA表达的水平。（3）利用MTT检测胃癌细胞系CTC105和CTC141敲减和过表达MALAT1后细胞增殖能力的变化。（4）建立胃癌异种移植小鼠模型,研究MALAT1沉默对裸鼠成瘤的影响。结果:（1）qRT-PCR结果显示,与正常胃上皮细胞GES-1相比,MALAT1在胃癌细胞系MKN45、CTC105和CTC141细胞中表达显著上调。（2）利用MALAT1过表达质粒和靶向MALAT1的siRNAs转染CTC105和CTC141细胞,在两种细胞系中实现了 MALAT1的过表达和下调。（3）MALAT1的过表达可以增加胃癌细胞的增殖,MALAT1的敲减可以抑制胃癌细胞的增殖。（4）MALAT1沉默能够在体内抑制胃癌的生长。结论:（1）相比正常胃上皮细胞,MALAT1在胃癌细胞系中的表达水平升高。（2）MALAT1在体内外实验均可促进胃癌细胞的增殖。第三部分MALAT1通过miR-204调控自噬影响胃癌细胞增殖的机制研究目的:本研究通过对miR-204细胞功能实验的研究进一步验证并阐述miR-204参与调控胃癌增殖的相关分子机制。方法:（1）首先分析MALAT1表达与miR-204表达的相关性。（2）然后利用qRT-PCR分析miR-204在胃癌细胞系（MKN45,CTC105和CTC141）与胃上皮细胞系GES-1细胞中的表达。（3）检测MALAT1在细胞系CTC105和CTC141中过表达或者敲减后,miR-204的表达水平。（4）在转染MALAT1过表达载体后,转染miR-204 模拟物的 CTC105 细胞中,qRT-PCR 检测 miR-204 表达,WB 检测 LC3B 和 Ki67的表达。（5）利用细胞克隆实验来检测MALAT1过表达载体或miR-204模拟物转染的CTC105细胞的集落形成能力。（6）检测MALAT1上调或者下调对CTC105和CTC141细胞的增殖影响,以及检测这影响能否被自噬抑制剂3-甲基ladenine（3-MA）抑制。（7）WB检测在CTC105细胞系中MALAT1过表达和敲减对于Ki-67和L3B表达的影响。（8）qRT-PCR检测CTC105、CTC141细胞中分别或者共同进行MALAT1过表达质粒转染、miR-204模拟物转染,然后检测LC3B和TRPM的mRNA表达水平。并对胃癌组织中miR-204与自噬激活分子TRPM3表达进行相关性分析。WB检测miR-204模拟物转染的胃癌细胞中LC3B和TRPM3的表达水平。（9）qPCR检测裸鼠肿瘤组织中MALAT1和mi-204的表达以及利用WB检测了组织中自噬相关蛋白LC3B的表达变化。结果:（1）相关性分析发现,在胃癌组织中miR-204和MALAT1表达水平呈负相关（P＜0.001）。（2）qRT-PCR结果显示,与正常胃上皮细胞GES-1相比,miR-204在胃癌细胞系MKN45、CTC105和CTC141细胞中的表达显著下调。（3）在CTC105和CTC141细胞中MALAT1下调后,miR-204表达水平升高,而过表达MALAT1的CTC105和CTC141细胞中miR-204表达水平降低。（4）MALAT1的过表达增加CTC105细胞中LC3B和Ki67的表达,在miR-204模拟物转染后,抑制了LC3B和Ki67的表达增加。（5）集落形成分析表明,MALAT1促进了胃癌细胞的集落形成能力,而miR-204转染后CTC105细胞的集落形成能力明显减弱（P＜0.01）。（6）MALAT1增加了 LC3B和TRPM3 mRNA表达水平,而miR-204共表达消除了CTC105和CTC141细胞系中的这些作用。（7）TRPM3和miR-204表达水平在胃癌组织中呈负相关。（8）Western blot免疫印迹实验表明,在用miR-204模拟物转染的CTC105和CTC141细胞中,LC3B和TRPM3蛋白水平显著降低。（9）裸鼠肿瘤组织中qPCR检测结果表明,相比较si-NC组,在si-MALAT1组中MALAT1表达降低,而miR-204表达升高。此外,通过WB检测结果表明,自噬相关蛋白LC3B在si-MALAT1组较对照组明显减少。结论:（1）MALAT1负性调节miR204影响细胞的增殖;（2）miR-204负性调节自噬影响增殖;（3）MALAT1通过自噬调节细胞的增殖。（4）基于上述结果,lncRNAMALAT1通过miR-204/自噬轴上调胃癌细胞的增殖,促进肿瘤增殖。