高酸海棠果花色苷的提取鉴定及纳米负载血液相容性研究

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本文以新疆产的三种高酸海棠果为原料,用酸化的甲醇提取其中的花色苷,并用Amberlite XAD-7大孔树脂分离和SephadexLH-20葡聚糖凝胶纯化,用pH示差法分析了花色苷的含量和UPLC-ESI-MS鉴定了其中花色苷的种类。以单体花色苷C3G为研究对象,使用离子交联的方法,合成了4种负载C3G的纳米粒子体系,用TEM和TITR进行表征,并研究了在体外模拟体系中的缓释效果,并评价了他们的血液相容性和细胞毒性。得到以下主要结果与结论:(1)“红勋1号”、“红勋2号”、“红勋3号”三种高酸海棠果中花色苷的含量依次为9.92、18.24和8.28mg/100 g FW。“红勋1号”主要有两种花色苷,矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-阿拉伯糖苷,“红勋3号”主要含有矢车菊素-3-葡萄糖苷。“红勋2号”中花色苷的种类初步推测为Vitisins A (Cyanidin)和Vitisins A (Peonidin)。(2)成功合成了四种负载花色苷的纳米粒子体系C3G-CS-TPP、C3G-CS-PGA、 C3G-CSO-PGA和C3G-CMC-CaCl2,其平均粒径分别为288、376、310和180 nm,zeta电位分别为30、32.6、36.9和-19 mV,具有良好的稳定性,并对他们进行TEM和FITR的表征,模拟了纳米粒子在pH7.4、pH6.8、pH5.0和pH 5.0+溶酶体的PBS缓冲溶液中的花色苷释放,表明花色苷纳米粒子的体外释放对pH具有敏感特征,即在较低的pH条件下,可以较迅速的将花色苷从中释放出来, 且累积释放量明显高于生理pH的环境。而在较高pH时,则释放行为变得缓慢。(3)通过这四种负载C3G纳米粒子对红细胞的溶血和形态,血浆的APTT值、PT值和全血的TEG影响,来进行血液相容性评价。低浓度的纳米粒子对红细胞没有明显的溶血作用,对血浆的APTT和PT值无显著影响,TEG分析表明纳米粒子有一定的促凝血作用,但影响较小,这与纳米粒子的带正电有关,结果证明了四种负载花色苷纳米粒子与血液都具有良好的相容性。细胞毒性实验表明,不同浓度的纳米粒子对LO2的成活率没有明显的影响,所合成的纳米粒子具有良好的生物相容性。
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