【摘 要】
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microRNA-222-3p在很多种类的肿瘤中表现出高水平的表达,在大多数情形下micro RNA-222-3p发挥癌基因的作用。虽然miRNA-222在急性髓细胞白血病患者中同样过表达,然而我们对micro RNA-222-3p在AML中的生物学功能和其中的潜在机制仍然知之甚少。因此,为了深入探讨其作用与机制,本研究采用miRNA-222-3p inhibitor和miRNA-222-3p m
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microRNA-222-3p在很多种类的肿瘤中表现出高水平的表达,在大多数情形下micro RNA-222-3p发挥癌基因的作用。虽然miRNA-222在急性髓细胞白血病患者中同样过表达,然而我们对micro RNA-222-3p在AML中的生物学功能和其中的潜在机制仍然知之甚少。因此,为了深入探讨其作用与机制,本研究采用miRNA-222-3p inhibitor和miRNA-222-3p mimic构建出miRNA-222-3p敲低和miRNA-222-3p过表达的AML细胞。我们根据CCK-8以及细胞计数的结果,发现在miRNA-222-3p敲低组中AML细胞的增殖明显受到抑制,然而在miRNA-222-3p过表达组中AML细胞的增殖明显被促进。我们通过流式细胞术,发现miRNA-222-3p被敲低后,AML细胞的凋亡率明显上升了;反之miRNA-222-3p过表达后,AML细胞的凋亡率明显下降了。此外,我们在免疫印迹试验中观察到,当miRNA-222-3p被敲下来时,促凋亡蛋白（包括cleaved caspase3、caspase3、bax和caspase9）表达水平明显上升,然而抑制凋亡的蛋白Bcl-2表达水平明显下降;然而miRNA-222-3p过表达后,促凋亡蛋白（包括cleaved caspase3、caspase3、bax和caspase9）表达水平明显下降,然而抑制凋亡的蛋白Bcl-2表达水平明显上升。轴抑制蛋白2（AXIN2）是miRNA-222-3p的一个预测靶标,是Wnt/β-catenin途径的负向调节因子。我们通过实时荧光定量PCR以及免疫印迹试验证实了miRNA-222-3p负向调节AXIN2在m RNA以及蛋白水平的表达量。另外,我们通过免疫印迹试验实证了miRNA-222-3p过表达后c-myc、β-catenin以及cyclin D1的表达水平显然上升,与此同时GSK-3β的表达水平显然下降。这些发现表明miRNA-222-3p能够增强Wnt/β-catenin信号转导途径。双荧光素酶试验表明了AXIN2是miRNA-222-3p的靶点,miRNA-222-3p可以直接结合AXIN2的3’非翻译区。通过CCK-8、细胞计数试验、免疫印迹试验以及流式细胞术,我们发现AXIN2的上调在AML细胞中明显减少细胞增殖,显著增加细胞凋亡率,发挥肿瘤抑制因子的作用。此外,AXIN2的上调可以一定程度的逆转miRNA-222-3p mimic导致的效应,例如增加AML细胞的增殖,减少AML细胞的凋亡,还有增强Wnt/β-catenin信号转导途径。总而言之,借由这些发现我们可以推断出miRNA-222-3p通过直接结合AXIN2的3’非翻译区靶向抑制AXIN2的表达,从而增强Wnt/β-catenin信号转导途径,增加AML细胞的活力同时下降AML细胞的凋亡水平。这一研究提供了证据说明miRNA-222-3p有望成为治疗AML的有效靶标,给AML的精准治疗发展了更多的选择策略。
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