论文部分内容阅读
河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila),隶属鲈形目(Perciformes),沙塘鳢科(Odontobutidae)。为我国重要的淡水经济鱼类。本文采用生物化学和分子生物学的研究方法,对河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中蛋白酶活性变化的规律以及胰蛋白酶活性与胰蛋白酶mRNA表达的相互关系进行了系统研究。主要研究结果总结如下:在胚胎发育初期,其胃蛋白酶的活性一直很低,在孵化前期,其胃蛋白酶的活性增高,之后继续升高,在孵出后5 d的仔鱼,其胃蛋白酶的活性达到最高。在胚胎发育初期,其胰蛋白酶活性相对较高,在眼黑色素出现期时明显升高,而在孵化前期时再次升高,孵出后5 d的仔鱼,其胰蛋白酶的活性亦达到最高。这也说明在河川沙塘鳢的胚胎、仔鱼发育过程中,其蛋白酶的活性总体呈上升的趋势。用Trizol提取到该鱼的总RNA,测得A280 / A260均在1.8-2.0之间。以RNA为模板,用自己设计的引物进行PCR,分别得到了555bp和224bp的河川沙塘鳢胰蛋白酶特异性cDNA扩增片段。并且通过序列比对以及同源性分析,证明实验所得了克隆片段确为胰蛋白酶cDNA片段。采用实时荧光定量PCR的方法,以SYBR Green为荧光染料,梯度稀释的PCR产物为模板制作标准曲线,并以此方法分析了河川沙塘鳢胚胎、仔鱼发育过程中胰蛋白酶mRNA表达的动态变化。结果显示,在胚胎及仔鱼的发育过程中胰蛋白酶mRNA的表达量与胰蛋白酶活性变化趋势一致。即:在胚胎发育初期就可以测得胰蛋白酶mRNA的表达量,在眼黑色素出现期升高,孵出后5 d的仔鱼,其胰蛋白酶mRNA的表达量达到最高。这也就说明在河川沙塘鳢的胚胎、仔鱼发育过程中,胰蛋白酶mRNA表达存在着动态变化,且胰蛋白酶活性的变化主要受其基因的调控。