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目的:Toll样受体9(TLR9)是细胞表面的一类天然模式识别受体,在机体免疫应答中起着重要作用。本研究通过检测TLR9基因启动子、内含子及外显子不同区域4个SNP位点基因型分析其单核苷酸多态性与儿童EB病毒感染的相关性,拟从基因层面探讨儿童感染EB病毒后临床疾病类型及预后转归存在差异的原因。方法:收集无EBV感染及EBV感染后不同临床表现类型的患者临床病例资料及外周静脉血标本,其中EBV感染相关性嗜血细胞综合征患者3例,传染性单核细胞增多症患者56例,轻微临床症状型EBV活动性感染患者69例,EBV感染阴性者(EBV抗体检测均为阴性)54例。通过数据库查阅TLR9基因SNP位点相关信息,并结合相关文献,最终确定TLR9基因启动子区rs187084(T/C)、rs5743836(T/C),内含子区rs352139(A/G),外显子区rs352140(G/A)四个位点作为研究对象。应用盐析法提取人外周血标本DNA,Primer5、Oligo2及NCBI数据库设计引物,聚合酶链反应(PCR)扩增包含有所选SNP位点的目的DNA片段,将PCR产物直接测序,通过测序峰图分析SNP位点基因型,比较不同组别间基因型及等位基因频率差异。结果:(1)在本实验人群中,对于所选SNP位点,位点rs187084基因型有TT、TC、CC三种,rs352139基因型有AA、AG、GG三种,rs352140基因型有GG、GA、AA三种,最小等位基因频率分别为39.7%,38.8%,41.9%。以上三位点在实验人群中具有多态性,且与NCBI(dbSNP)数据库及Ensembl(1000Genomes)数据库中公布的其在中国人群中分布状况相似。而位点rs5743836基因型有TT、TC两种,其中以TT基因型为主,TC基因型在所有样本中仅发现1例,表明此位点在实验人群中不存在多态性。(2)EBV相关性嗜血细胞综合症3例各位点基因型分布如下:位点rs187084:T/T2例,T/C1例;rs352139:A/A2例,A/G1例;rs352140:G/G2例,G/A1例。(3)在其余实验组别间,各位点基因型及等位基因分布情况如下表:三组间各位点基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)盐析法可应用于多个外周血样本的DNA提取,操作方法简便,提取的DNA浓度及纯度均比较理想。(2)在纳入研究的182例儿童中,TLR9基因rs5743836位点不存在多态性,故研究基因多态性与疾病的相关性时此位点需要慎重选择。(3)在纳入研究的182例儿童中,TLR9基因rs187084、rs352139、rs352140三个位点存在多态性,且人群中的分布情况与相关数据库中类似,未发现此三个位点的基因多态性与儿童EB病毒感染具有相关性。