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目的观察脊柱推拿对脑瘫幼鼠大脑皮层炎症细胞因子TNF-α与IL-10的表达变化及其DNA甲基化水平,探索脊柱推拿对脑瘫幼鼠大脑皮层炎症的拮抗作用与机制。方法将69只新生SD幼鼠严格按照研究标准筛选出符合条件的30只雄性幼鼠,随机分为3组:空白对照组(n=10)、模型对照组(n=10)、实验组(n=10)。实验组和模型对照组于P3(3-day-postnatal,出生后第三天)采用左侧颈总动脉结扎联合缺氧方法制备脑瘫模型,空白对照组不予处理。P4两组通过翻正实验验证模型成功后实验组予脊柱推拿干预,1次/日,15min/次,持续28天,其余两组不予干预。三组给予相同生存环境及饲养方式。三组相同的时间点检测体重、运动平衡功能,即P21进行平衡木及倾斜板实验。P33处死全部实验幼鼠,24h取材,利用免疫组化染色、Western Blot及焦磷酸测序技术检测三组幼鼠大脑皮层组织TNF-α与IL-10的炎症反应及其蛋白的表达变化和基因启动子Cp G位点甲基化水平。结果1.体质量监测显示:实验组幼鼠精神状态良好、反应灵敏,发育正常,体重增长较快,与空白对照组相比无明显差异。模型对照组幼鼠毛色暗淡、反应迟缓,体重增长缓慢。实验开始前三组幼鼠体重两两比较P>0.05,无统计学差异,P13三组幼鼠体重两两比较均有统计学差异(P<0.05),且P13时实验组幼鼠体重增长比模型对照组较快。处死前P31时幼鼠体重空白对照组>实验组>模型对照组。2.造模结果显示:三组幼鼠翻正时间进行两两比较,结果表明,空白对照组与实验组、模型对照组分别比较均有统计学差异(P<0.05),而实验组与模型组的比较P=0.293>0.05,两组无统计学差异。3.幼鼠运动平衡功能:1)平衡木实验显示:平衡木通过时间:P21~P23及考试三组幼鼠平衡木通过时间结果比较,空白对照组与实验组、模型对照组三组两两比较均有统计学差异(P<0.05),且通过时间空白对照组<实验组<模型对照组;平衡木后肢下滑次数:P21~P23及考试三组幼鼠平衡木通过后肢下滑次数结果比较,三组两两比较均有统计学差异(P<0.05),且通过平衡木后肢下滑次数空白对照组<实验组<模型对照组。2)倾斜板实验显示:三组幼鼠倾斜板实验结果比较,三组两两比较均有统计学差异(P<0.05),且通过倾斜板角度空白对照组>实验组>模型对照组。4.幼鼠大脑皮层炎症反应行免疫组织化学染色显示:1)各组幼鼠大脑皮层炎症因子TNF-α阳性细胞染色结果比较,可观察到模型对照组相较于空白对照组与实验组明显分布密集。2)各组幼鼠大脑皮层炎症因子IL-10阳性细胞染色结果比较,可观察到实验组相较于空白对照组与模型对照组明显分布密集。5.脑皮层炎症因子蛋白表达行Western Blot实验显示:1)三组幼鼠炎症因子TNF-α蛋白表达水平结果,空白对照组与模型对照组有统计学差异(P<0.05),空白对照组与实验组无统计学差异(P=0.0645>0.05),实验组与模型对照组的比较也有统计学差异(P<0.05),且皮层炎症因子TNF-α的蛋白表达水平模型对照组>实验组>空白对照组。2)三组幼鼠炎症因子IL-10蛋白表达水平结果,空白对照组与实验组、模型对照组分别比较均有统计学差异(P<0.05),实验组与模型对照组的比较也有统计学差异(P<0.05),且皮层炎症因子IL-10的蛋白表达水平实验组>模型对照组>空白对照组。6.脑皮层炎症因子DNA甲基化水平行焦磷酸测序显示:1)TNF-α基因启动子Cp G位点甲基化水平结果,实验组、模型对照组、空白对照组在炎症因子TNF-α基因启动子区域DNA甲基化频率除了在TNF-αCp G5位点无统计学差异(P>0.05)外,在其余位点中均有统计学差异(P<0.05),且两两比较中实验组、模型对照组分别与空白对照组比较均有统计学差异(P<0.05),而实验组与模型对照组比较8个位点均无统计学差异(P>0.05)。表明实验组及模型组炎症因子TNF-α基因在启动子区Cp G1、Cp G2、Cp G3、Cp G4、Cp G6、Cp G7的DNA甲基化水平显著降低,而在Cp G8位点的DNA甲基化水平升高。2)实验组、模型对照组、空白对照组在炎症因子IL-10的基因启动子区域的各个位点的DNA甲基化频率差异均无统计学差异(P>0.05)。表明三组间IL-10基因启动子区域甲基化水平差异不大。结论1.脊柱推拿可提高脑瘫幼鼠运动平衡能力。2.脊柱推拿可降低脑瘫幼鼠大脑皮层促炎性细胞因子TNF-α蛋白表达水平,提高抗炎性细胞因子IL-10的蛋白表达水平,通过重建脑瘫炎症相对稳态促进脑损伤的修复。3.脊柱推拿对脑瘫幼鼠大脑皮层炎症的拮抗作用机制可能与推拿调控了炎症细胞因子TNF-α和IL-10基因启动子区域甲基化水平有关。