目的：以B型血友病为基研究对象,构建含有肝特异性元件的表达载体,利用先前我们已经发现来自腺相关病毒的、具有单一位点整合功能的RBE-Rep核心元件建立的位点特异性整合转基因体系、检测携带hFIX的载体在转基因动物模型体内的动力学特征及整合情况,并对其毒性进行评估。方法：构建RBE-HCR-hAAT-hFIX质粒,评估其在不同细胞的表达情况,并与之前构建的RBE-CMV-hFIX质粒进行比较：RBE-HCR-hAAT-hFIX质粒与Rep表达质粒通过高压尾静脉注射的方式共同给予转人类AAVS1位点的小鼠,。ELISA检测hFIX蛋白表达在不同时间点的表达情况,PCR和RT-PCR评估质粒在体内的分别和转录,100天后进行大部分肝切除手术,nested-PCR检测其整合情况,RBE-CMV-hFIX质粒作为对照；检测系统安全性,测定注射后不同时间点肝损伤及谷丙转氨酶变化情况。结果：RBE-HCR-hAAT-hFIX质粒在体内的hFIX蛋白表达RBE-CMV-hFIX质粒相比在注射开始并无显著差异,但在注射120天后,RBE-HCR-hAAT-hFIX质粒的hFIX蛋白表达几乎是RBE-CMV-hFIX的4倍,且在以后的实验中持续明显高于RBE-CMV-hFIX质粒。RBE-HCR-hAAT-hFIX质粒整合效率不低于RBE-CMV-hFIX质粒组。高压尾静脉注射后,会对动物肝脏有急性的但是瞬时的损伤且由于这种操作引起而非质粒本身。结论：将裸质粒作为载体,利用RBE-Rep定点整合系统,使用组织特异性元件代替CMV启动子可以获得更高效、长时间的表达。