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漆酶(Laccase,EC1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,作用底物广泛,在环境污染治理等领域具有广阔的应用前景。本课题以实验室前期获得的一色齿毛菌(Cerrena unicolor)HYB07菌株漆酶为基础制备固定化酶,探索最适的固定化条件,比较固定化酶的酶学性质,并利用游离酶/固定化酶降解环境污染物,结果如下:1、选择交联酶聚集体(CLEAs)、海藻酸钠包埋法、壳聚糖交联法3种方法对HYB07漆酶进行固定化。通过对交联酶聚集体制备条件优化得到:以硫酸铵或丙酮为沉淀剂、戊二醛为交联剂,酶活回收率分别为68.08%和59.51%;以硫酸铵为沉淀剂、壳聚糖为交联剂,酶活回收率为40.37%;以磁性纳米颗粒与交联酶聚集体结合制备磁性交联酶聚集体,酶活回收率为46.76%。另外,海藻酸钠包埋法和壳聚糖交联法优化得到的固定化酶酶活回收率分别为29.37%、50.50%。2、对不同固定化漆酶进行酶学性质研究。与游离酶相比,固定化酶的热稳定性得到显著的提高;反应动力学研究表明,固定化酶的底物亲和力较游离酶降低;将固定化酶用于RBBR脱色,使用5次后,仍保留50%以上活力。另外,CLEAs较游离酶对金属离子、有机溶剂和NaCl具有更高的耐受性。Li+、Hg2+ Ni2+对CLEAs的抑制作用降低;在不同有机溶剂(20%)中,CLEAs均能保留70%以上酶活力。NaCl对游离酶和CLEAs的抑制属于混合型抑制,且CLEAs的抑制常数KI、KIS分别为8.3、29.0mM,游离酶的KI、KIS分别为1.6、11.5mM;在不同NaCl浓度下,CLEAs对RBBR脱色半衰期较游离酶极大缩短。3、HYB07漆酶介导孔雀石绿和RBBR脱色,通过响应面分析得到最佳脱色条件,脱色率达90%以上。通过LC-MS鉴定了漆酶介导孔雀石绿的降解中间产物,推测了HYB07漆酶可同时通过两条途径降解孔雀石绿。利用漆酶/介体系统对蛋白凝胶进行脱色,最优脱色条件为2μmMABTS、15U/mL酶活、37℃下脱色2h。利用固定化漆酶对多环芳烃、塑化剂、环境激素和抗生素进行降解,其中对菲、邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、乙烯雌酚、盐酸四环素等多种有机污染物的降解率大于80%;并通过LC-MS鉴定了四环素的降解产物。本课题对HYB07漆酶固定化条件优化,提高了漆酶的稳定性和重复利用性;对环境污染物降解条件和降解机制的研究,将为漆酶在环境治理上的应用奠定基础。