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MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中普遍存在的一种大小为21-24nt内源性、非编码、具转录或者翻译水平上调控靶基因的单链小分子RNA。miRNA参与植物生长发育的调控,并在多种生物与非生物胁迫响应中发挥重要作用。 osa-miR2102-3p是从水稻种子中分离并鉴定出来的一个新的小分子RNA[6],在其它物种中还未发现有与之同源的miRNA。迄今为止没有发现关于osa-miR2102-3p功能的相关研究报道。本研究中,以粳稻ZH11为材料,通过构建osa-miR2102-3p超表达载体,运用生物信息学、基因工程、细胞生物学、生理生化等多种手段,研究osa-miR2102-3p的生物学功能。主要研究结果如下: 1、OsFBR基因是osa-miR2102-3p的靶基因通过miRNA靶基因预测软件工具psRNA Target预测得到的osa-miR2102-3p候选靶基因有6个,qRT-PCR结果表明候选靶基因LOC_Os11g33310.1在osa-miR2102-3p超表达转基因植株中表达量显著下调。通过RACE技术克隆得到靶基因的全长cDNA,共有1278 bp,命名为OsFBR(GenBank登录号:KJ577093)。通过RLM5-RACE实验进行进一步验证,实验结果表明OsFBR的断裂位点在预测的osa-miR2102-3p识别位点16nt处。因此确定OsFBR为其靶基因。 2、OsFBR与osa-miR2102-3p在正常植株的时空表达上存在负相关性通过定量PCR研究分析发现:osa-miR2102-3p在水稻抽穗期的根、茎、叶、穗和叶鞘等器官中都有表达,在根中的表达量高于茎、叶、穗和叶鞘。与之相反,靶基因OsFBR则主要在营养生长期的水稻叶片中表达,在根中的表达相对较低。表明OsFBR与osa-miR2102-3p的表达在时空表达模式上存在负相关性。 3、靶基因的生物学功能分析生物信息学预测这个基因含有一个F-box结构域。在已有的研究报道中,OsFBR是与植物类黄酮合成相关的基因。进一步通过GFP荧光共定位的研究手段发现OsFBR在细胞核和细胞质中均有表达。 4、超表达osa-miR2102-3p导致种子萌发延迟osa-miR2102-3p超表达转基因植株种子的萌发比对照要慢。利用高效液相色谱法测定野生型和osa-miR2102-3p超表达转基因植株种子的类黄酮含量的结果表明,与野生型材料相比,osa-miR2102-3p超表达转基因植株种子的类黄酮含量明显下降。分析的水稻叶片中类黄酮途径相关基因表达情况发现,与野生型相比,大部分类黄酮途径相关基因OsDFR、OsLAR、OsGST、OsFLS、OsMATE、OsMRP、OsAHA10、OsLAC在osa-miR2102-3p超表达转基因植株中表达下调,OsPAL、OsCHS、OsF3H、OsF3H初OsCHI这几个基因在野生型和osa-miR2102-3p中表达差异不明显。