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目的:
1.监测首都医科大学附属北京天坛医院2006年8月至2010年12月住院患者脑脊液培养阳性标本的细菌流行病学分布及耐药状况,比较神经外科与神经内科,神经外科脑外伤与非脑外伤患者术后颅内感染脑脊液病原菌构成及耐药状况,以期对临床经验性抗菌药物治疗提供依据。
2.初步建立一种应用基因芯片及导流杂交技术快速检测中枢神经系统感染常见病原菌的方法。
方法:
1.对送检微生物室的脑脊液培养标本进行细菌培养、鉴定及药敏试验,分析病原菌分布和药敏结果。
2.以细菌16srRNA和23SrRNA基因序列设计通用引物和探针,将探针固定在Biodynec膜上,制成检测芯片,用通用引物对提取的DNA进行PCR扩增,将扩增产物与检测芯片在核酸分子快速杂交仪上进行杂交,根据显色情况判断结果;用中枢神经系统感染常见病原菌的标准菌株及临床菌株对该方法进行验证,并对脑脊液感染模拟标本和临床脑脊液标本进行检测。
结果:
1.共分离出病原菌950株,其中革兰阳性菌(G+)632株(67%),革兰阴性菌(G-)309株(32%),真菌9株(1%)。前六位病原菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌(49%)、不动杆菌(12%)、金黄色葡萄球菌(7%)、肠球菌(6%)、铜绿假单胞菌(3%)和肺炎克雷伯菌(3%)。神经内、外科主要细菌构成比进行比较,革兰阳性菌在神经外科中的比例(68%)高于神经内科(56%),铜绿假单胞菌在神经内科所占比例(9%)高于神经外科(2%)。脑外伤组共分离到病原菌97株,其中革兰阳性菌占59%,革兰阴性菌占41%;非外伤组分离到病原菌558株,其中革兰阳性菌占69%,革兰阴性菌占30%,真菌1%。脑外伤组革兰阴性菌、不动杆菌属和大肠埃希菌的构成比高于非外伤组。革兰阳性菌对万古霉素、利奈唑胺敏感率高,革兰阴性菌对亚胺培南、阿米卡星较敏感。
2.根据5株标准菌株与291株临床菌株的检测结果,芯片特异性97.6%,芯片检测的革兰阴性菌灵敏度为10CFU/ml,革兰阳性菌灵敏度为103CFU/ml。对混合感染,芯片具备较好的并行检测能力。75例脑脊液感染模拟标本芯片检测结果的准确率为96%。31例临床脑脊液标本芯片检测与传统培养方法的符合率为96.8%。
结论:
1.中枢神经系统感染以革兰阳性菌多见,尤其是神经外科的革兰阳性菌比例更高,主要为凝固酶阴性葡萄球菌。监测颅内感染病原菌分布及药敏情况,可为中枢神经系统感染的预防和经验性抗菌药物治疗提供可靠数据资料。
2.本研究初步建立了一种快速、敏感、准确的以基因芯片和导流杂交技术为基础的鉴定中枢神经系统感染常见病原菌的方法。