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沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌,抗菌药物的广泛使用以及多种可移动遗传元件对耐药基因的水平转移和重组导致了多重耐药沙门氏菌的流行。IS26能借助自身的转座作用协同Ⅰ型整合子对基因盒进行捕获与整合,实现多个耐药基因在单个质粒中聚集成束,从而导致多重耐药的产生。并且,质粒上IS26-Ⅰ型整合子复合排布具有在细菌间广泛传播多重耐药性的潜能。本研究旨在通过探讨IS26与Ⅰ型整合子的排布规律来揭示IS26与Ⅰ型整合子共同介导的沙门氏菌多重耐药机制。本研究的主要内容如下:1、通过液体接合法获得了一株多重耐药沙门氏菌SJTUF 10584的质粒pS10584,鉴定后发现该质粒属于I1不相容群(Incl1),携带blaCMY-2耐药基因并介导AMP-SAM-CZO-CRO-CAZ耐药表型。质粒测序结果分析表明 pS10584 上的外源耐药区域包含IS1294-△ISEcp1-blaCMY-2-blc-sugE-△ecnR的基因排布,截断并整合到IncI1质粒骨架上的cia基因中;2、对74株携带质粒的沙门氏菌进行IS26、ISEcp1和IS1294的PCR筛查,以IS26的检出率为最高(52.7%,39/74);利用纸片扩散法对携带IS26的菌株进行耐药谱筛查,94.9%(37/39)至少对一种抗生素具有耐受性,其中70.3%(26/37)具有多重耐药表型;3、对37株IS26扩增阳性的耐药菌株进行I型整合子的检测以及可变区耐药基因盒的PCR扩增,37株均扩增出了I型整合子的5’保守端和3’保守端,I型整合子的检出率为100%(37/37)。其中Ⅰ型整合子可变区扩增阳性率为43.2%(16/37)。本研究共鉴定了4种不同的基因盒阵列,分别为dfrA12-orfF-aadA2、dfrA17-aadA5-IS26、6、7-aadA5和 dfrA12-orfF-△aadA2-IS26-△Tn3-orf;4、针对报道较多的IS26与Ⅰ型整合子的位置关系,对IS26和I型整合子扩增均为阳性的菌株进行IS26与Ⅰ型整合子排布形式的PCR扩增。对于IS26以正向插入Ⅰ型整合子上游的位置关系,本研究共鉴定出3种不同的排布形式,分别为IS26-aac(6’)-Ib-cr-blaOXA-1-catB3-a.rr3-3’CS、IS26-blaOXA-1-catB3-arr3-3’CS和 IS26-△tnpR-tnpM-intI1-dfrA17-aadA5-3’CS;对于IS26以正向插入Ⅰ型整合子下游的位置关系,本研究共鉴定出3种不同的排布形式,分别为5’CS-dfrA12-orfF-△aadA2-IS26、5’CS-estX-psp-aadA2-△cmlAl(3’-15 bp 处被截断)-IS26和5’CS-estX-psp-aadA2-△cwA1(5’-524 bp处被截断)-IS26;仅在31株耐药沙门氏菌中扩增出IS26以正向插入Ⅰ型整合子上游或下游的复合排布形式,并鉴定出8种IS26-Ⅰ型整合子复合排布模式;5、本研究中,IncHI2为主导的质粒不相容群,并且携带6种IS26-Ⅰ型整合子复合排布模式,利用pDLST对IncHI2质粒进行分型,利用液体接合法探究IncHI2质粒和IS26-Ⅰ型整合子复合排布形式的关联性,并对IncHI2质粒的接合效率进行评估。结果,除了两株菌的IncHI2质粒由于扩增不出smr0019基因而无法进行分型,其余IncHI2质粒均为ST3型(20/22)。接合实验共获得了 19株接合子,接合率为95%(19/20),IncHI2质粒、多重耐药表型及所有IS26-Ⅰ型整合子复合排布形式(除了SJTUF 10577的5’CS-dfrA12-orfF-△aadA2-IS26)均发生了转移。IncHI2质粒的单独接合效率为10-5～10-6,质粒上不同IS26-I型整合子复合排布模式对IncHI2质粒的接合效率没有显著影响(P>0.05)。IncHI2质粒和IncI1质粒进行共同转移的接合效率均为10-4,表明Incl1质粒能带动IncHI2质粒进行转移,同时提高其转移效率。综合分析表明,Ⅰ型整合子是IS26的插入热点,IS26能在不同位点插入到Ⅰ型整合子中,从而形成多样化的多重耐药决定位点。在本研究中ST3型IncHI2质粒主要介导了IS26-Ⅰ型整合子多重耐药复合元件的水平转移,而高移动性接合质粒如IncI1能带动IncHI2质粒高效转移,进一步加速了IS26-Ⅰ型整合子复合排布的扩散。本研究结果为进一步深入探究IS26与Ⅰ型整合子介导的多重耐药机制提供理论依据,对追踪和监测IS26-Ⅰ型整合子共同介导的耐药传播以及IncHI2多重耐药质粒进化历程具有重要意义。