口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)是一种常见的恶性肿瘤。然而,OSCC发生发展的分子机制尚不完全清楚。在本研究中,我们发现DEP结构域1蛋白(DEPDC1)在OSCC组织中过表达,而DEPDC1表达的增加与OSCC患者的肿瘤大小和不良临床结局密切相关。我们通过对过表达和敲低DEPDC1的OSCC细胞进行m RNA高通量测序发现了DEPDC1的下游基因CYP27B1(细胞色素P450家族27亚家族B成员)。OSCC细胞功能研究表明,DEPDC1通过抑制CYP27B1的表达来促进OSCC细胞的增殖。此外,我们发现DEPDC1的表达上调与OSCC患者的吸烟史密切相关。体外实验表明,烟草化合物NNK通过增加OSCC细胞中DNMT1的表达,促进其基因体的甲基化,从而促进DEPDC1的表达。值得注意的是,在体内实验中我们也发现DEPDC1的敲低会抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而显著抑制OSCC的生长。这些发现表明,吸烟通过DNMT1对DNA甲基化的调控促进DEPDC1在OSCC中的过表达,而上调的DEPDC1通过抑制CYP27B1的表达促进OSCC细胞的增殖。研究结果探讨了OSCC发生发展的新机制,发现DEPDC1可作为OSCC预后的生物标志物和治疗靶点,为进一步研究OSCC的生物学特性提供了新的实验依据,也为OSCC的临床治疗提供了新的思路。方法:1.免疫组化(IHC)、q RT-PCR、蛋白质印迹(WB)检测DEPDC1在OSCC临床样本和OSCC细胞系中的表达。2.Celigo、CCK-8检测DEPDC1对OSCC细胞增殖的影响,流式检测DEPDC1对OSCC细胞凋亡的影响。3.裸鼠皮下和原位成瘤实验。4.q RT-PCR、蛋白质印迹(WB)、免疫组化(IHC)检测CYP27B1在OSCC临床样本和OSCC细胞系中的表达。5.CCK-8、Ed U检测DEPDC1和CYP27B1对OSCC细胞增殖的影响。6.BSP检测NNK处理OSCC细胞后DNA甲基化的改变;q RT-PCR、蛋白质印迹(WB)检测NNK处理OSCC细胞后DNMT1的表达;蛋白质印迹(WB)检测DNMT1、DEPDC1、CYP27B1的表达。结果:1.在OSCC组织中,DEPDC1的表达显著增加,且与OSCC患者的不良预后密切相关;同时,OSCC细胞系中也能检测到DEPDC1的表达。2.DEPDC1促进OSCC细胞增殖,抑制细胞凋亡。3.DEPDC1在裸鼠体内可促进OSCC的生长。4.在OSCC组织和细胞系中检测到CYP27B1的表达;同时,我们还发现在OSCC细胞中,CYP27B1受DEPDC1的负调控。5.CYP27B1抑制OSCC细胞的增殖,而且DEPDC1可通过抑制CYP27B1的表达促进OSCC细胞的增殖。6.NNK可通过DNMT1促进OSCC细胞中DEPDC1的表达。结论:1.DEPDC1在OSCC中起着致癌作用。2.DEPDC1通过抑制OSCC中CYP27B1的表达而发挥其致癌作用。3.NNK通过促进OSCC中的DNMT1表达而引起DEPDC1的上调。