马尾松针黄酮类物质的抑菌作用及成分研究

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本论文以马尾松针为原材料,水、75%乙醇、75%丙酮为提取溶剂,研究黄酮类物质的提取纯化技术,以及对常见食品腐败菌及致病菌的抑制作用,考察了黄酮类物质抑菌活性的稳定性,同时采用系统溶剂萃取法、薄层层析法分离纯化其抑菌活性组分,并经NMR、IR等波谱技术进行结构分析鉴定及验证化合物的抑菌活性,得到了以下主要结论:(1)浸膏得率和总黄酮提取率综合指标说明马尾松针中的黄酮类化合物在丙酮和乙醇中的溶解度要明显大于在水中的溶解度;水、75%乙醇、75%丙酮提取物不仅对金黄色葡萄球菌等8种食品腐败细菌均表现出很强的抑制作用,还能抑制部分果蔬采后病原真菌的生长代谢,其中75%丙酮提取物的抑制作用最强。因此,选用75%丙酮作为马尾松针黄酮类物质抑菌成分的提取溶剂。(2)抑菌稳定性试验表明,马尾松针黄酮类物质对热和紫外光照具有良好的稳定性;经过不同放置时间后抑菌活性略有降低;pH显著影响马尾松针黄酮类物质的抑菌活性,在酸性范围内,提取物具很强的抑知作用,而在碱性范围内抑菌活性显著下降;加入金属离子对黄酮类物质的抑菌活性起到了促进作用, Fe2+对金黄色葡萄球菌、乙型伤寒沙门氏菌的增效作用要优于其他离子,但降低了提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用;加入的常见食品添加剂中Na2SO3、Vc、EDTA二钠、磷酸氢钠促进了提取物的抑菌能力,其中EDTA二钠的效果最好;而CMC-Na、柠檬酸的加入则降低了黄酮类物质的抑菌活性。(3)对黄酮类物质粗提物进行分级萃取,各组分的抑菌试验表明,有效抑菌成分主要集中在中等极性部分的乙酸乙酯萃取液中;通过考察单溶剂和双溶剂的展开效果,确定以二氯甲烷:甲醇:冰乙酸=8.5:1.5:0.05(v/v/v)为展开剂,马尾松针黄酮类物质的乙酸乙酯萃取液可在薄板上分离出9条清晰、集中的条带。其中,Rf值在0.3~0.8之间的条带有5条。各条带大量刮板后经结晶和重结晶后得到5个样品,分别命名并编号为化合物C、化合物D、化合物E、化合物F和化合物G。(4)MIC试验结果表明,化合物F、G没有抑菌作用,化合物C、D、E对供试菌的抑菌效果显著。其中,化合物C、D、E对供试菌的抑制作用与常用食品添加剂苯甲酸钠和山梨酸钾的抑菌能力相当;用IR、核磁共振法对纯化后的马尾松针黄酮抑菌组分进行结构分析鉴定,推断化合物C可能为二氢杨梅素、D为二氢槲皮素、E槲皮素。
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