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脂肪细胞过度增殖和肥大是导致肥胖发生的主要原因,研究前脂肪细胞增殖与分化有助于深入了解脂肪组织发育的生理学和病理学的机理。RAS是一个具有内分泌特性的调节机体血压的系统,研究者发现脂肪组织中表达的RAS系统能促进脂肪分化和积累,但也有研究报道得出相矛盾的结论,可见关于RAS对前脂肪细胞分化的影响仍需要进一步探索和研究。
1、HPA-v人前脂肪细胞生长及分化的生物学特性DMEM培养基常规培养HPA-v人前脂肪细胞,采用IBMX+地塞米松+胰岛素的DMEM培养基诱导HPA-v人前脂肪细胞的分化,在前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞过程中,观察分化过程中脂肪细胞形态学变化,并测定分化过程中脂肪细胞胞内脂质含量及GPDH活性变化。结果表明:HPA-v分化过程中,胞内脂质含量随分化时间的增加而增加,诱导分化到第6d后脂质增加迅速。GPDH活性也随分化的进行而增加,诱导分化到第3 d后迅速增大,第12 d左右达到峰值并维持在相对较高水平。
2、HPA-v人前脂肪细胞分化过程中RAS及肥胖相关基因的表达变化在HPA-v人前脂肪细胞分化的第0,3,6,9,12和15天,均提取各时段中脂肪细胞中总RNA,逆转录,荧光定量PCR检测在HPA-v分化过程中肾素.血管紧张素系统中的血管紧张素原(AGT)、肾素、血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ受体1和受体2(AT1R,AT2R)、瘦素和抵抗素基因mRNA的表达变化情况。结果显示,HPA-V人前脂肪细胞株在诱导分化为成熟脂肪细胞过程中,RAS系统的组分的mRNA转录水平发生变化,AGT表达逐渐增加,肾素无明显变化,ACE不断减少,肾素AngⅡ受体1和受体2在诱导分化初期明显增加,在分化中后期逐渐降低；瘦素表达显著增加；抵抗素分泌也不断增加。
3、AGT干扰质粒对HPA-v前脂肪细胞分化的影响设计并构建针对.AGT基因的短发夹状RNA(shRNA)重组质粒,转染入HPA-v后,观察其对HPA-v人前脂肪细胞分化的影响。设计、合成2对靶向AGT编码基因的反向重复序列,分别定向克隆至载体PsiRNA-hH1neo的H1转录启动子下游,构建Psi-AGT1,Psi-AGT2重组质粒,分别转染到HPA-v人前脂肪细胞；设计并转染不针对任何基因的Psi-AGT0作为阴性对照组。转染后,用弱分化培养基诱导HPA-v人前脂肪细胞的分化。分光光度测定各组细胞分化过程中胞内脂质含量及GPDH活性变化。
结果表明：分化到第15d,以Psi-AGT0为对照,Psi-AGT1脂质含量和GPDH活性分别下降了12％和 19％,Psi-AGT2脂质含量和GPDH活性分别下降了6％和11％。显著性分析可得,诱导分化到第9和15天,Psi-AGT1沉默组与Psi-AGT0对照组胞质中的GPDH活性存在显著性差异,油红O染色检测细胞中脂质含量得出,沉默组Psi-AGT1和Psi-AGT2在各个时段与Psi-AGT0对照组均无显著性差异。