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巨大儿是指出生时新生儿体重≥4 000克。在我国,巨大儿占出生总数的5. 62 %～6. 69 %[1]。随着我国人民生活水平的提高,以及围生期保健知识的普及,多数孕妇能量摄入增多,运动减少,使得巨大儿的发生率呈明显的上升趋势。尽管多数巨大儿是生理性的、健康的产儿,但有些出现病理性症状。妊娠合并糖尿病,孕前肥胖,遗传因素,内分泌失调等等都是临床上常见的巨大儿诱因。但是,若要明确巨大儿发生的确切机制,依然需要从分子水平来分析。近年来,激素水平与胎儿发育的关系备受科研人员的关注,已有多项研究表明胰岛素、胰岛素样生长因子、甲状腺素、生长激素、瘦素、成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor, FGF)等等都与胎儿的生长发育密切相关[3,4,5,6]。而胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factor,IGF)与巨大儿发生关系最为密切,其表达水平或基因印迹状态的变化都能导致胎儿生长过度,并伴有多种畸形。Glypican蛋白属于硫酸肝素蛋白聚糖(Heparan sulfate proteoglycans,HSPGs)家族,其通过糖基磷脂酰肌醇(GlycosyI phosphatidyIinositoI,GPI)而锚定在细胞外膜上,可结合肝素结合型蛋白如生长因子、细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)成分、细胞黏附分子和与降解通路有关的分子,调控着细胞分化、增殖等行为,在机体的生长发育中起着重要的作用。多项研究结果表明,glypican家族成员与生长发育密切相关,而glypican-3无疑与生长发育的关系最为密切。已有报道证实glypican-3与胎儿生长过度综合症(Simpson-Golabi-Behmel syndrome,SGBS)密切相关[2]。而glypican-6作为glypican家族的最新成员,已有研究报道其在胎盘组织中具有表达[3],但是尚未报道其与胎儿生长的相关性。目的:本研究分别从mRNA和蛋白水平对比glypican-3和glypican-6在巨大儿和正常体重新生儿胎盘组织中表达水平差异,以探讨glypican-3在巨大儿发生中的作用。方法:1.采集24例正常体重新生儿胎盘组织,17例巨大儿胎盘组织,液氮中保存。2.用Trizol试剂盒提取胎盘组织总RNA ,用SuperScriptTM First-Strand Synthesis System试剂盒反转录合成cDNA,Takara PCR试剂盒扩增glypican-3,glypican-6,管家基因GAPDH作为内参,从而在mRNA水平检测glypican-3和glypican-6在正常体重新生儿和巨大儿胎盘组织中的表达差异。3.RIPA方法提取胎盘组织总蛋白,靠马斯亮蓝方法蛋白定量,SDS-PAGE分离总蛋白后,半干转印方法将蛋白转移到PVDF膜上,与glypican-3,glypican-6或GAPDH第一抗体孵育后与抗鼠第二抗体孵育,最后ECL曝光,从而在蛋白水平检测glypican-3和glypican-6在正常体重新生儿和巨大儿胎盘组织中的表达差异。4.以Biorad公司的Quantity One软件分析表达条带的灰度值,利用SPSS15.0软件进行统计学分析,以p<0.05作为具有统计学差异。结果:Glypican-3无论在mRNA水平还是蛋白水平,巨大儿组都稍低于正常体重新生儿组,两组差别有统计学意义(P<0.05)。而glypican-6在两组间无显著性差异(P>0.05)。结论:Glypican-3在巨大儿胎盘组织中表达水平低于正常体重新生儿,可能与巨大儿的发生相关。而巨大儿胎盘组织中glypican-6的表达水平与正常体重新生儿相比无明显差异。