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目的： 研究Hippo信号通路下游作用因子Yes Associated Protein1（YAP）/TEA Domain Transcription Factor1(TAZ）在高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus， HPV）-16 E6与 E7癌蛋白诱导的 A549细胞非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC） sex-determining region Y-box protein2（Sox2）、Octamer-Binding Transcription Factor4（Oct4）、Nanog和基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases，MMPs）表达的影响，初步分析YAP/TAZ在HPV-16相关肺癌发生发展中的作用，从而为与HPV相关肺癌的预防、治疗提供新的潜在靶点。 方法： 1. HPV-16 E6或E7癌蛋白对A549细胞干细胞标志物Sox2、Oct4、Nanog表达影响的分析：通过瞬时转染的方法，用脂质体将携带有HPV-16 E6或E7及其突变体基因、空载体的质粒(pEGFP-HPV-16 E6、pEGFP-HPV-16 E6 mutant、pEGFP-HPV-16 E7、pEGFP-HPV-16 E7 mutant、pEGFP-N)分别转染A549肺癌细胞，阴性对照组为EGFP质粒空载体（pEGFP-N），模拟转染对照组为只加转染试剂的细胞。转染完成后，采用流式细胞术检测转染效率。分别采用Western blotting和实时定量PCR检测干细胞标志物Sox2、Oct4、Nanog的蛋白和mRNA的表达情况。 2. HPV-16 E6或E7癌蛋白对YAP表达的影响：用Real Time RT-PCR和Western blotting分析成功转染E7癌蛋白的A549细胞YAP的mRNA和蛋白表达情况。 3. YAP siRNA的选择：用瞬时转染方法将非特异性YAP siRNA（Negative control）和特异性YAP siRNA（YAP-homo-1858、YAP-homo-1662、YAP-homo-1517）转染到A549细胞，模拟转染对照组为只加转染试剂组，用Western blotting检测YAP的蛋白表达情况。 4.沉默YAP基因对HPV-16 E7诱导的Sox2、Nanog、Oct4表达的影响：用YAP siRNA和HPV-16 E7共转染A549肺癌细胞，分别用Western blotting和实时定量PCR检测干细胞标志物Sox2、Nanog、Oct4的蛋白和mRNA的表达情况。 5.平板克隆形成实验检测YAP基因、HPV-16 E6、E7癌蛋白对A549细胞体外增殖能力的影响。 6. HPV-16 E7癌蛋白对MMPs表达的影响及YAP基因沉默对此的作用：用HPV-16 E7质粒转染及YAP siRNA和HPV-16 E7质粒共转染A549肺癌细胞，采用实时定量PCR初步检测MMP3、MMP7、MMP12、MMP13 mRNA表达的变化，再进一步用ELISA分析MMP3的蛋白分泌变化。 7.转染细胞迁移能力的检测：采用划痕实验分析YAP基因和HPV-16 E7癌蛋白对A549细胞迁移侵袭能力的影响。 结果： 1.瞬时转染后，在A549肺癌细胞中HPV-16 E6、E7癌蛋白可以增强干细胞标志物Sox2、Oct4、Nanog的蛋白和mRNA的表达，增强A549细胞体外克隆增殖能力。 2.分别将三条特异性基因序列沉默YAP基因的YAP siRNA（YAP-homo-1858、YAP-homo-1662、YAP-homo-1517）转染到A549肺癌细胞中，Western blotting结果表明YAP-homo-1517对YAP的抑制效果最好。 3.沉默YAP基因后，HPV-16 E7癌蛋白诱导的A549肺癌细胞干细胞标志物Sox2、Oct4、Nanog的表达受抑，A549细胞体外克隆增殖能力减弱。 4. HPV-16 E7癌蛋白可促进A549肺癌细胞MMP3、MMP7 mRNA的表达，沉默YAP基因后可抑制HPV-16 E7癌蛋白诱导的的MMP3 mRNA表达。进一步还发现，HPV-16 E7癌蛋白可促进A549肺癌细胞MMP3蛋白分泌，沉默YAP 基因后可可对此进行抑制。而且，HPV-16 E7癌蛋白与YAP siRNA共转染的A549细胞迁移能力减弱。 结论： HPV-16癌蛋白能够促进A549肺癌细胞Nanog、Sox2、Oct4、MMP3的表达及A549肺癌细胞的体外增殖、迁移能力，而且YAP/TAZ信号途径参与了此过程的调控。