【摘 要】
：
目的:通过观察泽泻汤对体内外NASH肝纤维化模型的生化指标、肝脏组织病理学、氧化应激指标及Nrf2通路相关蛋白表达和基因水平的影响,从而探讨阐释泽泻汤对NASH肝纤维化治疗的可能机制。方法:1.体内实验:随机选择36只雄性健康C57BL/6小鼠,将其随机分成6组（n=6）:空白对照组（组1）、模型组（组2）、泽泻汤高浓度组（组3）、泽泻汤中浓度组（组4）、泽泻汤低浓度泽（组5）、维生素E组（组6）
【基金项目】
：
国家自然科学基金青年项目,项目编号:81703879； 2016年院级重点专科建设招标（2016103A）；
论文部分内容阅读
目的:通过观察泽泻汤对体内外NASH肝纤维化模型的生化指标、肝脏组织病理学、氧化应激指标及Nrf2通路相关蛋白表达和基因水平的影响,从而探讨阐释泽泻汤对NASH肝纤维化治疗的可能机制。方法:1.体内实验:随机选择36只雄性健康C57BL/6小鼠,将其随机分成6组（n=6）:空白对照组（组1）、模型组（组2）、泽泻汤高浓度组（组3）、泽泻汤中浓度组（组4）、泽泻汤低浓度泽（组5）、维生素E组（组6）。适应性喂养1周后开始实验,按照如下进行喂食,实验时间为19周:组1喂食标准饲料饲;组2-组6喂食CDAA饲料（choline deficient L-amino acid diet,CDAA）。组3、4、5每日以0.5ml剂量泽泻汤对小鼠进行灌胃。泽泻汤高浓度（水提物1.0368g/ml）、泽泻汤中浓度（水提物0.5184g/ml）和泽泻汤低浓度（水提物0.2592g/ml）。第6组为维生素E组（Vitamin E,VE）,每日喂食4IU。19周后分别检测血清生化指标,肝组织氧化应激指标;使用天狼猩红染色以及H＆E染色对小鼠肝脏病理组织学变化进行观察;透射电镜（Transmission Electron Microscope,TEM）观察肝脏线粒体损伤;免疫组化检测α平滑肌肌动蛋白（Al Pha-smooth muscle actin,α-SMA）表达水平;2.体外实验:实验共设立六组。空白对照组（组1）、模型组（组2）、泽泻汤320ug/ml（组3）、泽泻汤160ug/ml（组4）、泽泻汤80ug/ml（组5）:泽泻汤320ug/ml+全反式维甲酸10μmol/L（组6）。组1使用1640培养基、组2-组6使用蛋氨酸胆碱缺乏（Methionine-Choline-Deficient,MCD）培养基。将各组条件培养基与L0-2细胞共同孵育24小时。试剂盒检测L0-2细胞ROS等含量;并用Western Blot和RT-PCR检测氧化应激、Nrf2通路相关蛋白及基因水平的表达情况。结果:1、泽泻汤对NASH肝纤维化模型小鼠干预作用:与模型组比,泽泻汤降低了模型小鼠的ALT、AST（P均＜0.0001）;TG、LDL给药组与模型组之间无统计学差异。泽泻汤降低了模型小鼠的NAS评分（P＜0.001）,改善了肝脏脂质蓄积,减少了炎性细胞浸润和坏死灶,天狼猩红染色阳性区域也较模型组减少;2、泽泻汤通过抑制氧化应激对NASH肝纤维化模型小鼠干预作用:泽泻汤降低了模型组小鼠ROS、MDA、GSH的水平（P＜0.05）,对肝脏线粒体具有保护作用并减少了α-SMA阳性细胞的表达。同时,予泽泻汤干预后,Nrf2通路被激活,KEAP1蛋白和m RNA表达因为和Nrf2解离而下降（P＜0.05）,Nrf2、NQO-1、HO-1蛋白和m RNA表达上调（P＜0.05）;3、泽泻汤通过Nrf2通路抑制氧化应激对NASH肝纤维化细胞模型干预作用:泽泻汤显著降低模型组ROS水平（P＜0.0001）,当Nrf2通路抑制时,泽泻汤并不能降低模型组ROS水平。泽泻汤组与模型组比较,细胞抗氧化应激相关基因和蛋白表达上调,当Nrf2通路抑制时,泽泻汤组抗氧化应激相关基因和蛋白与模型组无统计学差异。结论:1、泽泻汤改善了NASH肝纤维化模型小鼠的肝功能、血脂、肝脏脂肪变性、炎性细胞浸润以及纤维化,减少了天狼猩红染色阳性区域,且呈明显的剂量依赖关系。2、泽泻汤通过Nrf2通路保护肝脏线粒体,抗氧化应激,降低NASH肝纤维化模型小鼠血清ROS、MDA、GSH,减少α-SMA表达,从而起到干预NASH肝纤维化模型小鼠的作用。3、泽泻汤通过激活Nrf2通路,降低细胞模型ROS水平抗氧化应激,从而起到干预NASH肝纤维化细胞模型的作用。
其他文献
目的:本论文旨在探讨化疗药物奥沙利铂（L-OHP）作用机体后,对机体内环境中粒细胞集落刺激因子（G-CSF）-髓源性抑制细胞（MDSCs）途径的影响,以及结肠癌肺转移的发生机制。并结合中医基础理论知识,研究中药复方肠胃清对机体化疗药物干预后结肠癌肺转移的影响,以阐明化疗药物联合肠胃清治疗结肠癌的增效减毒作用机制。方法:1.利用慢病毒稳定转染小鼠结肠癌细胞CT-26,构建CT-26-Luc细胞株。将
目的:结直肠癌是世界上常见的胃肠道恶性肿瘤之一,目前,其治疗手段以手术为主,而化疗与放疗等其它方法作为辅助治疗方式。其中化学疗法可抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞死亡并增加人体对肿瘤的免疫反应。然而,由于肿瘤细胞对化学疗法的抵抗力,使其成为导致癌症死亡的主要原因。癌细胞通过多种机制在原发和转移位点获得抗性,涉及细胞的内在和外在因素,但后者经常被忽视。越来越多的证据表明,肿瘤微环境（TME）在癌症进展
目的:观察和中健脾方及其拆方对混合反流性食管炎模型大鼠食管黏膜损伤的治疗作用,对相关胃肠激素水平的影响及对CaM/MLCK信号通路的影响,探讨和中健脾方治疗混合反流性食管炎模型大鼠的作用机制。方法:采用贲门结扎加食管十二指肠吻合术建立混合反流性食管炎模型大鼠,按随机数字表将56只健康SD雄性大鼠（SPF级）分为正常组、假手术组、模型组、和中组、和中健脾组、降气组以及西药莫沙必利组,每组各8只。造模
目的:本论文研究肠胃清协同奥沙利铂促进树突状细胞（DC）成熟抑制结肠癌皮下移植瘤生长的作用,从肿瘤免疫学角度阐述肠胃清临床协同化疗治疗结肠癌的理论依据。方法:1.建立Balb/c小鼠皮下移植瘤模型,分别给予生理盐水（Ctrl组）,奥沙利铂腹腔注射（OXA组）,肠胃清灌胃（CWQ组）,以及肠胃清和奥沙利铂联合用药（Com组）,通过瘤体大小变化曲线,小动物活体成像,观察肠胃清对结肠癌皮下瘤生长的抑制作
目的:研究COMMD3m RNA和蛋白表达水平在肝癌组织及其癌旁组织（正常肝组织）中的差异,以及对患者生存预后进行相关性分析。通过体外实验研究COMMD3对人肝癌细胞的影响。最后通过天冬多糖的干预,研究中药天冬多糖对COMMD3表达的影响以及对人肝癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响。方法:从The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库挖掘并分析人肝癌及癌旁组织（人正常肝组织）中C
目的:（1）研究黄连水提物对血管内皮细胞芽生能力的调节及TRIM28蛋白表达及修饰的调节机制。（2）研究TRIM28蛋白是否通过VEGF-DLL4-Notch信号通路对血管内皮细胞芽生发挥调节作用及其具体调节机制。方法:（1）采用Western Blot技术,检测黄连水提物以及信号通路抑制剂对血管内皮细胞中TRIM28表达以及磷酸化修饰的影响;（2）采用Western Blot技术检测VEGF以及
目的脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞（Alveolar type II epithelial cells,ATII）损伤建立急性肺损伤（acute lung injury,ALI）体外细胞模型,探讨大黄素（Emodin）干预ALI的细胞内保护机制,为中医药多途径多靶点治疗ALI提供新的思路。方法新生3天内SD大鼠中进行原代ATII提取,经电镜、激光共聚焦显
背景系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus,SLE）是一种自身免疫性炎症性结缔组织病,其主要临床特征为血清中出现多种自身抗体和免疫复合物沉积,并可累及全身多系统多器官。其临床表现多样,病情复杂,严重危害患者的生命和生存质量[1]。其发病机制尚不明确,目前认为可能与遗传因素、免疫异常、感染、环境因素有关[2]。本病至今尚无公认的根治手段,临床上西医多采用激素、免疫抑
目的:乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,紫杉醇作为乳腺癌临床上常用化疗药物之一,在治疗乳腺癌方面具有良好的疗效,但长期使用容易产生耐药现象,严重制约了其临床应用。我们前期研究发现熊果酸能促进KLF4的表达水平,降低DNMT1的表达水平,且乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性与KLF4表达水平相关,本课题拟在前期基础上进一步探索熊果酸通过KLF4增强乳腺癌紫杉醇敏感性的机制,为熊果酸联合紫杉醇的临床应用提供理
目的:分析慢性阻塞性肺疾病痰浊阻肺型中医症状积分分级与各个肺叶肺气肿指数、GOLD（Global Initiative for Obstructive Lung Disease,慢性阻塞性肺疾病全球创议）分级的关联性;各个肺叶肺气肿指数与肺功能参数进行相关性分析并得出结论;观察苏子降气汤加减方对慢性阻塞性肺疾病痰浊阻肺型患者的临床疗效,探索苏子降气汤加减方的临床应用价值。方法:1.通过上海市普陀区