论文部分内容阅读
目的: 研究miR21的表达对宫颈癌Siha细胞顺铂敏感性的影响及影响机制,为宫颈癌的有效治疗提供理论依据。 方法: 实验分四组进行,miR21下调组、miR21上调组、阴性对照组及空白对照组,实时荧光定量 PCR检测转染后各组细胞中miR21基因的表达水平;cck-8比色法检测各组细胞对顺铂的 IC50值;Annexin V/PI法检测顺铂处理后各组细胞的凋亡率;实时荧光定量 PCR和蛋白印迹法分别从 mRNA和蛋白水平检测顺铂对各组细胞中PTEN、PDCD4的影响。 结果: 1、qRT-PCR检测转染后各组细胞中miR21的表达水平结果显示:下调组miR21的表达明显低于阴性对照组,上调组 miR21的表达明显高于阴性对照组。 2、cck-8比色法实验结果显示:顺铂对下调组的 IC50值为(2.44±0.69) ug/ml,显著低于阴性对照组细胞(3.96±0.07)ug/ml;上调组细胞(6.93±0.07) ug/ml显著高于阴性对照组细胞。 3、Annexin V/PI法实验结果显示:5ug/ml顺铂诱导下调组的凋亡率为(64.36±2.47)%,显著高于阴性对照组细胞(4.2±0.17)%;5ug/ml顺铂诱导上调组细胞(0.06±0.03)%显著低于阴性对照组细胞(4.2±0.17)%。 4、qRT-PCR检测 PTEN、PDCD4实验结果显示:下调 miR21在细胞的表达后 PTEN、PDCD4的 mRNA表达显著高于阴性对照组,上调 miR21在细胞的表达后PTEN、PDCD4的mRNA表达明显低于阴性对照组。 5、蛋白质印迹法(western blot)检测PTEN、PDCD4实验结果显示:下调miR21在细胞的表达后 PTEN、PDCD4的蛋白表达显著高于阴性对照组,上调miR21在细胞的表达后PTEN、PDCD4的蛋白表达明显低于阴性对照组。 结论: 基因转染技术能有效上调或下调宫颈癌细胞系Siha中miR21的表达。下调miR21可能增加细胞对顺铂的敏感性;上调 miR21可能减弱细胞对顺铂的敏感性。miR21可能通过负性调控 PTEN、PDCD4的表达,从而影响宫颈癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性。