CHD3（chromodomain helicase DNA binding protein 3）属于ATP依赖性染色质调节域解旋酶DNA结合蛋白（CHD）家族之一,该家族一共包括9个成员,又分为三个亚家族,其中CHD3、CHD4、CHD5属于第二亚家族（CHDⅡ）。CHD3也被称为Mi-2α,作为皮肌炎患者的自身抗原首次被发现,随着皮肌炎的恶化,往往也会促进其他并发症出现,主要是增加典型皮疹伴坏死性肌炎和恶行肿瘤的风险。猪在很多方面与人类具有非常高的相似性,比如生理水平、解剖水平、基因水平等,所以猪被公认为是研究人类疾病理想的模式动物。猪皮肤的结构、厚度、毛囊含量、胶原蛋白、脂质成分、色素沉着等与人类皮肤具有惊人的相似性。香猪属于小型的地方猪种,香猪具有个体矮小、性成熟早、繁殖快、生长快等特点,更适合作为模式动物来研究。在香猪群体中存在少数的皱皮个体,将皱皮表型的香猪作为亲本进行杂交,繁殖的仔猪中仍然存在部分皱皮表型的小猪,表明其皱皮表型可以遗传给子代。前期研究发现,在具有全身性皱皮的香猪CHD3基因中,3′-侧翼区存在一段264 bp核苷酸插入/缺失结构变异。本研究旨在探究CHD3基因结构变异与香猪皱皮的关系,为研究香猪皱皮的形成以及人类皮肤的衰老提供理论参考。本研究以大白猪、普通香猪、皱皮香猪为试验对象,皮肤组织学研究观察普通香猪与正常香猪皮肤的差异,利用生物信息学方法对CHD3基因结构变异进行分析,通过q PCR和Western blotting检测结构变异对CHD3基因表达量的影响,群体多态性研究的方法检测CHD3基因结构变异在猪群体之间分布的差异,最后初步解析CHD3基因结构变异与香猪皱皮形成的关系。本研究结果如下:1.通过皮肤组织学研究的方法比较皱皮香猪和普通香猪皮肤的差异,结果显示,普通香猪皮肤平整,皮肤内的胶原纤维和弹性纤维平行排列成紧密的网状结构、走向规律,然而皱皮香猪皮肤凹凸起伏明显,皮肤中胶原纤维和弹性纤维断裂、排列杂乱、走向无规律。2.基于实验室前期重测序分析结果,在具有全身性皱皮的香猪CHD3基因中,3′-侧翼区存在一段264 bp核苷酸插入/缺失结构变异,在该结构变异上下游设计特异性引物,通过PCR扩增结构变异位点,测序验证了该结构变异真实存在。3.利用UCSC、miRBase、miRanda、RBPsuite软件预测结构变异区间包含的重复元件、miRNA结合位点、RNA结合蛋白（RBP）的结合位点。分析结果显示在CHD3基因264 bp的结构变异内有35个miRNA结合位点和10个RBP结合位点,同时变异区间包含一个短散在元件（SINE）,属于t RNA家族。4.以RT-qPCR方法检测该变异位点对CHD3基因mRNA表达的影响,结果显示CHD3基因的DD基因型（缺失）和ID基因型（杂合）的mRNA表达量极显著高于II基因型（插入）（P＜0.01）。蛋白质免疫印记（Western blotting）检测该结构变异对CHD3基因蛋白表达量的影响,结果显示,DD基因型和ID基因型的蛋白表达量极显著高于II基因型（P＜0.01）。5.利用逆转录PCR（RT-PCR）检测结构变异在mRNA中的存在情况,CHD3在基因组DNA中的II型、ID型、DD型,在c DNA中对应的仍然是II型,ID型、DD型。6.采用PCR和SPSS卡方检验的方法对结构变异位点进行群体基因分型和多态性检测,同时检验猪群中的结构变异分布是否符合哈迪温伯格平衡（Hardy-Weinberg Equilibrium）。基因分型结果显示,在皱皮香猪、普通香猪、大白猪三个猪群中均检测到了II、ID和DD基因型,说明猪群中CHD3-SV264结构变异呈现丰富的多态性,普通香猪和大白猪中主要是II基因型,皱皮香猪中D等位基因频率极显著高于普通香猪和大白猪（P＜0.01）。χ~2检验结果显示CHD3基因结构变异在皱皮香猪和普通香猪中处于Hardy-Weinberg平衡状态（P＞0.05）,在大白猪中处于Hardy-Weinberg不平衡状态（P＜0.05）。综上,通过对CHD3基因结构变异进行分析和研究,并检测结构变异在猪群体之间分布的差异,最终推测CHD3基因3′侧翼区264 bp结构变异可能是香猪全身性皮肤褶皱形成的重要因素之一。