目的:本文对北苍术多糖的提取、分离纯化工艺进行了优选,并对其单糖组成、抗肿瘤活性进行了初步探测。研究了纯化后的北苍术多糖的部分物理化学性质,分子量,糖醛酸含量、单糖组成及其连接方式,为北苍术多糖的规模化生产及临床应用提供了实验依据。方法:1.以北苍术多糖的含量和纯度为指标考察了半纤维素酶、纤维素酶、果胶酶及其复合酶法辅助超声提取对北苍术多糖提取率的影响,优选出最佳的酶组合。利用正交试验考察酶解温度、酶解时间、酶解p H及料液比对北苍术多糖含量的影响,优选出最佳酶解工艺。2.以北苍术多糖损失率,脱蛋白率为指标,考察Sevag法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶酶解-三氯乙酸法及三氯乙酸-正丁醇法对北苍术多糖脱蛋白的影响。通过DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析和Sephadex-150凝胶柱层析进行分离纯化,得到北苍术精制多糖。3.通过间羟基连苯法测定糖醛酸的含量,并通过红外光谱(IR),凝胶渗透色谱,气质联用(GC-MS)对所得北苍术精制多糖进行了性质、分子量和组成分析的研究。并采用MTT法测定北苍术多糖对卵巢癌细胞株Skov3细胞增殖的抑制作用,台盼蓝法测定北苍术多糖对Hela细胞、肝癌细胞株hepg2及7721的影响。结果:1.酶法辅助超声提取北苍术多糖的最佳酶解组合为纤维素酶与果胶酶(比例为1:1),最佳酶解工艺为酶用量为药材的1.2%(g/g),在p H5、50℃条件下酶解50min,在此条件下,北苍术多糖的提取率是32.29%,远高于不酶解的对照组(高出48.66%)。DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析法及Sephadex G-150凝胶柱层析法分离均得到一个单一组分,经苯酚-浓硫酸法测定其纯度达92.68%。2.实验所得北苍术精制多糖为均一组分,白色粉末,易溶于水,其多糖含量为92.68%,蛋白质含量为0.8%,粗多糖和精制多糖糖醛酸含量分别为4.36%和4.07%,分子量为11171Da。红外光谱显示出多糖的特征峰。GC-MS测定其仅有果糖组成,并以2→1方式连接。3.北苍术多糖对卵巢癌细胞株skov3、人宫颈癌Hela细胞、肝癌细胞株hepg2及7721增殖均有明显的抑制作用,尤其是对肝癌细胞株hepg2增殖的抑制率达87.40%。结论:在本实验研究中,采用不同的酶对北苍术药材进行酶解后以超声提取北苍术多糖,以多糖的含量和纯度为指标,进行酶解北苍术工艺的初探。经过筛选,选定纤维素酶与果胶酶(比例为1:1)为北苍术的酶解方法。并以该方法辅助超声提取北苍术多糖,考察了酶解温度,酶解时间、酶解p H及料液比对北苍术多糖含量的影响。在此条件下,北苍术多糖的提取率为32.29%,远高于不酶解的对照组(比直接超声法高出48.66%),条件稳定且重现性好。本实验选取的脱蛋白方法为TCA法,在此方法下脱蛋白后的北苍术多糖含量高,损失少。脱蛋白后的北苍术多糖经DEAE阴离子交换柱和Sephadex-G150凝胶柱纯化后为单一峰,多糖纯度高达92.68%,GC-MS法测定其由果糖(98.2%)和少量的葡萄糖(1.8%)组成,并以2→1方式连接。综合甲基化及NMR图谱分析结果,ACPS的结构可以表示如下:α-D-Glcp-(1→2)-[β-D-Fruf-(1→2)-β-D-Fruf-]n-(1→2)-β-D-Fruf,其对对人卵巢癌细胞株Skov3、肝癌细胞株hepg2及7721、宫颈癌Hela细胞的增殖均有一定的抑制作用。本研究为扩大其临床应用范围提供了实验依据与参考。