【摘 要】
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目的:CRYGS基因外显子2的c.169（p.G57W）位点突变可以导致儿童遗传性白内障的发生。本实验以该突变为研究对象,探究G57W突变对mi RNAs表达的影响,为先天性白内障非编码RNA研究寻找新的突破口。方法:利用慢病毒转染的方式在人晶状体上皮细胞B3系（Human lens epithelial cells B3 line,HLEB3细胞）中构建目的基因,通过RNA测序技术筛选G57W突
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目的:CRYGS基因外显子2的c.169（p.G57W）位点突变可以导致儿童遗传性白内障的发生。本实验以该突变为研究对象,探究G57W突变对mi RNAs表达的影响,为先天性白内障非编码RNA研究寻找新的突破口。方法:利用慢病毒转染的方式在人晶状体上皮细胞B3系（Human lens epithelial cells B3 line,HLEB3细胞）中构建目的基因,通过RNA测序技术筛选G57W突变相关mi RNAs。实验分为NC组（阴性对照组）、CRYGS组（野生型CRYGS基因过表达组）和CRYGS＿G57W组（突变型CRYGS＿G57W基因过表达组）,将目的基因分别克隆入GV492慢病毒载体,获得重组质粒后转染293T细胞进行慢病毒包装,制备并浓缩获得慢病毒颗粒后感染HLEB3细胞,再经高通量测序筛选mi RNAs,并利用生物信息学方法对其靶基因进行预测和富集分析。结果:成功构建了CRYGS基因和CRYGS＿G57W基因的过表达慢病毒载体。高通量测序共筛选到84个与G57W突变相关的差异表达mi RNAs。与NC组相比,共有71个mi RNAs被鉴定到;与CRYGS组相比,共有13个mi RNAs被鉴定到,包括10个上调mi RNAs（mi R-148a-3p、mi R-151a-3p、mi R-224-5p、mi R-2682-5p、mi R-30a-3p、mi R-30e-3p、mi R-379-5p、mi R-493-5p、mi R-671-3p和mi R-941）和3个下调mi RNAs（mi R-125b-5p、mi R-17-5p和mi R-181a-5p）。生物信息学分析结果显示:84个mi RNAs共预测到9932个靶基因。与NC组相比,这些靶基因主要与细胞过程、单生物过程和蛋白结合相关,主要参与PI3K-Akt信号通路、癌症通路和MAPK信号通路;与CRYGS组相比,这些靶基因仅在细胞组分中被富集,主要在细胞内发挥生物学作用,主要参与Ras信号通路、Rap1信号通路和Insulin信号通路。结论:CRYGS基因G57W突变影响了mi RNAs的表达,其靶基因主要在细胞内发挥作用,主要参与Ras信号通路、Rap1信号通路和Insulin信号通路。CRYGS基因与mi RNAs之间的互相调控在先天性白内障发病机制中仍需进一步探索。
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