黄粉虫抗菌肽诱导方法的比较及实时荧光定量PCR分析

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为了给黄粉虫抗菌肽研究提供新的参考,探索黄粉虫抗菌肽的较优诱导方法,本论文以不同龄期的黄粉虫幼虫为试验材料,以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为诱导菌,微量注射、饲喂和针刺作为诱导方法诱导黄粉虫幼虫产生抗菌肽,对不同菌液浓度和不同方法诱导的不同龄期黄粉虫幼虫抗菌肽的抑菌效果进行研究,同时还进行了黄粉虫抗菌肽Tenecin 1、Tenecin 3、Tenecin 4 及ColeoptericinC四个基因的实时荧光定量PCR研究。结果如下:1、不同龄期的黄粉虫幼虫产生的抗菌肽抑菌活性上存在差异。采用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为诱导菌,对8龄、9龄和10龄的黄粉虫幼虫进行诱导后,发现其抗菌肽抑菌活性存在差异,在所有的诱导处理中,9龄幼虫的诱导效果好于8龄和10龄。2、不同菌液浓度诱导黄粉虫幼虫产生的抗菌肽抑菌活性上存在差异。将对数期浓度稀释10倍、100倍、1000倍,经3种不同浓度的菌液诱导后发现,在所有的不同菌液浓度诱导处理中,菌液浓度为对数期浓度的稀释100倍时效果较好。3、不同方法诱导产生的抗菌肽抑菌活性上存在差异。经相同浓度菌液诱导后发现,在所有的相同浓度菌液不同诱导方法处理中,微量注射诱导的效果较好。4、黄粉虫抗菌肽Tenecin基因实时荧光定量PCR结果。通过对黄粉虫抗菌肽的Tenecin 1、Tenecin 3.Tenecin 4 和ColeoptericinC4个基因进行实时荧光定量PCR分析后发现,除Tenecin 3基因经大肠杆菌诱导表达量下调外,其他抗菌肽基因都上调。
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