三角帆蚌内脏团珍珠培育及α巨球蛋白N末端保守域片断的原核表达

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8mm以上、光泽度好的正圆珍珠在国内外市场十分受关注,有核珍珠一般比无核珍珠的颗粒大。三角帆蚌有核珍珠常采用外套膜插核的方法;由于其外套膜比较薄,不适宜插植大核以培育大颗粒珍珠。然而,三角帆蚌内脏团区域空间很大,如果能在三角帆蚌内脏团内插核培育有核珍珠,就有可能成功培育大颗粒珍珠,能为淡水有核珍珠培育开辟一条新途径。 近年来,河蚌疾病一直困扰着珍珠养殖业的发展,预防河蚌疾病成了育珠生产的关键。对三角帆蚌的免疫因子的研究也已成为河蚌疾病预防研究的热点。 基于上述两方面,本研究对三角帆蚌内脏团插核培育大颗粒珍珠进行了探索,并对三角帆蚌免疫因子α2M基因N末端保守域片段的原核表达载体pET32a/α2M—N的构建及其诱导表达进行了初步研究。 1.三角帆蚌内脏团珍珠培育部位生物性状的研究 用光镜对三角帆蚌内脏团珍珠培育部位进行组织学观察和生化成分分析,结果显示该部位组织结构随性腺发育期发生变化:性腺发育前期,性腺滤泡萎缩,滤泡间充填丰富的结缔组织和平滑肌纤维薄层肌肉组织:发育后期,性腺滤泡丰满,滤泡间结缔组织和平滑肌纤维减少。生化分析显示钙、蛋白、碱性磷酸酶、碳酸脱水酶在内脏团珍珠培育部位均有分布,但钙的含量比常规外套膜插核的部位少;说明内脏团具有珍珠生物矿化所需的生化条件,内脏团培育珍珠是可行的;但性腺发育状况及钙贮存的不足会影响内脏团内珍珠的培育。 2.三角帆蚌内脏团有核珍珠培育技术的研究 采用组织块贴片培养包裹珠核后插入三角帆蚌内脏团的方法进行有核珍珠培育,结果表明,外套膜组织细胞贴核生长正常,插入内脏团后能够形成珍珠囊,经45天养殖后,可以看到在珠核外面已有珍珠层沉积。但内脏团插核后育珠蚌的死亡率为30—50%,吐核率高达20-30%,因此如何降低育珠蚌的死亡率和吐核率是今后进一步研究的重要课题。 3.三角帆蚌α2巨球蛋白N末端保守域片断的原核表达 以三角帆蚌血淋巴细胞提取的总RNA为模板,设计合成扩增三角帆蚌α2M基因N末端保守域片段的特异性引物,通过RT—PCR方法扩增目的基因片段。将纯化的RT—PCR产物采用酶切(Sac Ⅰ,Xhol)连接的方式,定向克隆至载体PET32 a中,构建重组质粒PET32a/α2M—N,经PCR验证和酶切反应验证,及测序分析表明已成功地构建了α2M基因N末端保守域片段的原核表达载体PET32a/α2M—N。重组质粒转化入表达菌株BL21,经SDS—PAGE分析表明α2M—N融合蛋白能在菌株BL21内经诱导后表达,能为α2巨球蛋白活性分析和生物学功能的研究奠定基础。
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