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聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)由于其特异性强、灵敏度高、快速简便等优点,一直是生命科学领域一种重要的研究手段。增强其特异性,提高其灵敏度,是PCR技术研究的重点。我们制备了平均粒径为15nm的γ-Fe2O3磁性纳米粒子,并对其进行链霉亲和素修饰。实验证明链霉亲和素修饰的γ-Fe2O3磁性纳米粒子具有良好的生物活性,可以进一步用于生物检测。我们将磁性纳米粒子γ-Fe2O3和多重PCR技术相结合,进行了磁富集多重PCR扩增,以增强其特异性,提高检测灵敏度。首先我们对该方法的可行性进行分析,进行了磁富集靶序列单重PCR扩增。在这一实验过程中,先将生物素修饰的特异性引物和靶序列杂交,然后通过链霉亲和素修饰的磁性纳米粒子γ-Fe2O3将其富集到表面,通过变性获取单链靶序列,再使用目的序列的扩增引物进行PCR扩增。通过对实验条件的优化,我们得到靶序列和特异性引物杂交的最适温度为52.5℃,链霉亲和素修饰的磁性纳米粒子γ-Fe2O3的最佳用量为90μg,该方法对靶序列检测的灵敏度为5×10-10ng/μL。确定了该方法的可行性。然后我们设计了AGT基因M235T位点和A-6G位点,MTHFR基因A1298C位点和C677T位点的扩增引物,在磁富集单重PCR的基础之上,对这四个位点进行磁富集多重PCR扩增,并优化了扩增条件。通过优化实验我们得到,这四个位点的磁富集多重PCR的退火温度为56℃,在30μL扩增体系中,25mmol/L的Mg2+用量为2.0μL,10μmol/L的dNTP用量为1.5μL,5U/μL的Taq酶用量为0.7μL,10mmol/L的四个位点引物的用量分别为:C677T1μL、M235T0.7μL、A1298C1μL、A-6G1.5μL。同时得到这四个位点的磁富集多重PCR扩增的灵敏度为5×10-9ng/μL。最后,结合通用引物PCR技术和基因芯片技术,对磁富集多重PCR扩增方法在这四个位点的SNP分型上进行了初步应用研究。