尿激酶型纤溶酶原激活物（尿激酶,uPA）是一种重要的肿瘤相关丝氨酸蛋白酶,它与其受体uPAR在众多肿瘤组织中过量表达。活性尿激酶激活基质金属蛋白酶、纤溶酶原等,进而降解细胞外基质,促进肿瘤细胞转移。同时,肿瘤部位的尿激酶也可以激活生长因子,促进肿瘤细胞的增殖,因此尿激酶已经作为乳腺癌诊断和预后的指标。由于三阴性乳腺癌（TNBC）具有较高的侵袭转移性,致使三阴性乳腺癌的治疗异常困难,死亡率较高。在本研究中我们发现槲皮素和萘莫司他对乳腺癌的标志蛋白尿激酶具有明显的抑制作用,但这些药物目前还存在作用机制不明确,水溶性及靶向性较差等问题。本研究采用X-射线晶体学,新颖纳米包裹等技术开展药物抑制机理及提高肿瘤组织靶向性研究,致力于提高槲皮素（Quercetin）和萘莫司他（Nafamostat,NM）这两种抑制剂对三阴性乳腺癌的药效,对三阴性乳腺癌药物的设计及递送研究具有重要意义。本论文分别以槲皮素和萘莫司他展开研究:1、槲皮素纳米粒的抗乳腺癌研究槲皮素是一种黄酮类化合物,具有多重生物学活性与药理作用,之前研究表明其能够以微摩尔效力抑制尿激酶。本课题通过解析槲皮素与尿激酶的复合物晶体结构,阐明了槲皮素不同于传统的尿激酶抑制剂的抑制机理。由于槲皮素存在水溶性差、在体内容易被氧化而失去药效,而且使用的剂量较大等问题,我们采用可溶性递送载体PLGA/TPGS纳米粒对槲皮素进行包封,获得高载药量、均一稳定的纳米粒（Qu-NPs）。体外和体内实验均证明Qu-NPs提高槲皮素对三阴性乳腺癌的增殖和转移的抑制作用,灌胃给药后,Qu-NPs对4T1原位荷瘤小鼠的抑瘤率达到67.88%,并且通过尿激酶敲低的MDA-MB231细胞验证槲皮素通过抑制尿激酶介导三阴性乳腺癌转移的机理。这将为治疗三阴性乳腺癌的药物设计及递送提供一个新的思路。2、基于萘莫司他与尿激酶复合物晶体结构的抗乳腺癌研究萘莫司他是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,我们测定了NM对一系列丝氨酸蛋白酶的抑制活性,并发现NM对尿激酶的抑制作用极强(IC50=5±1.8 nM)。通过解析尿激酶与NM的复合物晶体结构发现,当与活性尿激酶结合时,NM水解后产物4GB通过与Ser195共价结合于尿激酶的特异性底物结合口袋（S1口袋）。为了进一步阐明NM抑制尿激酶的分子机制,我们分别测定了4GB和6A2N对尿激酶的抑制活性及复合物晶体结构。结果表明,它们均可以结合于尿激酶的S1口袋,但抑制作用远弱于NM,这说明NM的结构完整性和与Ser195的共价结合是对尿激酶的强亲和力必不可少的。此外,我们还解析了NM与无活性尿激酶突变体（uPA-S195A）复合晶体结构,在该结构中,未被水解的NM以6A2N端插入S1口袋中,也验证了6A2N与尿激酶的结合力高于4GB。通过细胞实验表明,NM可以显着抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。为了克服NM特异性不高、容易被其他蛋白酶水解等缺点,我们使用重组蛋白mATF-HSA作为药物载体来分子包裹NM,从而减少递送期间NM的水解并改善NM对癌细胞的靶向性。总而言之,我们的研究为三阴性乳腺癌的治疗提供了一种有前景的新策略。