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壳核型量子点(Quantum Dots,QDs)作为一种新颖的纳米荧光材料,日益成为纳米生物光子学研究领域的一种重要的工具。与传统有机荧光染料相比,量子点具有宽的激发谱、发射峰窄而对称、较大的Stokes位移、抗光漂白性强、且亮度是有机染料的数十倍甚至更多,在生物成像和分析中的应用正逐年增多,包括在细胞标记、生物分子检测、免疫反应分析等方面,都取得了许多重要成果。量子点的研究已成为一门新兴的交叉科学,是目前最有吸引力的研究领域之一。本论文主要工作是研究了量子点的表面修饰,水溶性量子点与蛋白质的连接、偶联物生物活性以及生物应用等。具体包括的内容如下:
1讨论了不同修饰剂及它们的组合对量子点表面进行修饰后,量子点光学性质的影响,发现对于最大激发波长为568 nm的量子点,应用巯基十一酸与巯基乙酸钠组合对其修饰后,得到的水溶性量子点保持了脂溶性量子点的优良光学性质,其量子点产率相对于其他修饰剂或组合也比较高。
2利用水溶性量子点在偶联剂的作用下对羊抗人IgG进行了标记,通过超滤离心及层析的方法证明,该标记是十分有效的;又通过层析法对羊抗人IgG与水溶性量子点反应的比例进行了研究;对连接后蛋白的结构及偶联物生物学活性进行检测后发现连接后蛋白的结构未发生实质性变化,偶联物保持了蛋白原有生物活性,适合于免疫学的相关分析。
3提供了一种应用量子点对转铁蛋白(Tf)进行标记的方法,并利用细胞表面转铁蛋白受体与QD-Tf识别反应验证了QD-Tf的生物活性。具体内容为将水溶性QD用偶联剂与Tf连接起来,通过层析的方法对偶联反应产物进行了纯化;然后探讨了一种对纯化的反应产物浓度进行估算的方法,并依此推测了QD与Tf的连接比例,发现平均一个QD上连接有1.6个Tf;最后细胞表面Tf受体与QD-Tf识别反应证明QD-Tf保持了Tf的生物学活性。