[目的]肿瘤微环境中的免疫耐受与肿瘤发生发展密切相关,但其具体机制尚不明了,而趋化因子及其受体也在肿瘤进展中扮演重要角色。口腔鳞癌组织中趋化因子受体与免疫耐受之间是否存在相关性,需进一步研究。本课题以口腔鳞癌组织为研究对象,检测趋化因子受体CCR9、PD-L1/PD-1、p-Akt的表达情况以及CD8+T细胞、CD4+Foxp3+T细胞的浸润情况,从趋化因子受体角度探索口腔鳞癌免疫耐受形成因素。[方法](1)临床标本收集:收集由昆明医科大学附属口腔医院口腔颌面外科2011年1月至2018年6月收治和术后病理学诊断为口腔鳞状细胞癌的组织和与其相匹配的癌旁组织。(2)免疫组织化学方法:通过免疫组化方法检测瘤体中PD-1、PD-L1、CCR9、p-Akt蛋白的表达情况和CD8+T细胞浸润情况。免疫组化结果判读:以染色强度和阳性细胞数进行综合分析,按半定量积分法判定结果。每张切片随机选取5个高倍视野进行结果判定,具体标准为:(1)阳性细胞数:≤%记为0分;6%-25%记为1分;26%-50%记为2分;51%-75%记为3分;>75%记为4分;(2)阳性强度:淡黄色记为1分;黄色记为2分;棕黄色记为3分;以阳性细胞数和阳性强度两者之积判断阳性等级:0分为阴性(-);1-4分为弱阳性(+);5-8分为阳性(++);9-12分为强阳性(+++)。(3)免疫荧光双标方法:免疫组织荧光双标方法检测瘤体中CD4+Foxp3+T细胞浸润情况。免疫组织荧光双标结果判读:以荧光染色强度和阳性细胞数进行综合分析,按半定量积分法判定结果。每张切片随机选取5个高倍视野进行结果判定,具体标准为:(1)阳性细胞数:≤5%记为0分;6%-25%记为1分;26%-50%记为2分;51%-75%记为3分;>75%记为4分;(2)荧光染色强度:弱记为1分;中等记为2分;强记为3分;以阳性细胞数和阳性强度两者之积判断阳性等级:0分为阴性(-);1-4分为弱阳性(+);5-8分为阳性(++);9-12分为强阳性(+++)。(4)数据处理:结果采用SPSS 25.0统计软件进行统计分析。计数资料采用率及构成比表示,等级资料采用非参数Wilxon秩和检验,组间差异分析采用非参数检验的Kruskal-Wallis检验(即H检验),相关性分析采用Spearman等级相关性分析,以P<0.05表示差异有统计学意义。[结果](1)在81例组织标本中,男性患者53例,女性患者28例;患者年龄19-67岁,平均年龄为53.2岁;高分化48例,中分化22例,低分化11例;发生颈部淋巴结转移20例。(2)免疫组织化学染色法检测结果发现,OSCC组织中存在CCR9、PD-1、PD-L1、p-Akt的表达,均以阳性表达为主,且在OSCC组织中的表达显著强于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。CCR9、PD-L1和p-Akt主要表达于肿瘤细胞,其中PD-L1在间质中也有表达。PD-1在肿瘤细胞和间质细胞中均有表达,但以间质细胞表达为主。OSCC组织中存在CD8+T细胞浸润,浸润情况以阳性为主。通过Spearman等级相关性分析发现,CCR9、PD-L1、p-Akt在不同分化程度的OSCC组织中表达存在差异,且与分化程度存在相关性(P<0.05)。CD8+T细胞在OSCC组织中的浸润情况与其分化程度相关(P<0.05)。CCR9、PD-L1、p-Akt在OSCC组织中的表达情况与是否发生颈淋巴结转移存在相关性(P<0.05)。(3)免疫组织荧光双标法检测结果发现,OSCC组织中存在CD4+Foxp3+T细胞浸润,浸润情况以阳性为主,且浸润情况明显高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过Spearman等级相关性分析发现,CD4+Foxp3+T细胞在不同分化程度OSCC组织中的浸润情况存在差异,且与分化程度存在相关性(P<0.05)。CD4+Foxp3+T细胞在OSCC组织中的浸润情况与是否发生颈淋巴结转移存在相关性(P<0.05)。(4)通过对免疫组化和免疫荧光双标结果进一步分析发现,CCR9的表达情况与PD-L1、p-Akt的表达情况和CD4+Foxp3+T细胞的浸润情况呈正相关关系(P<0.05)。PD-L1的表达情况与PD-1、p-Akt的表达情况和CD4+Foxp3+T细胞的浸润情况呈正相关关系(P<0.05)。PD-1的表达情况与CD8+T细胞的浸润情况呈正相关关系(P<0.05)。p-Akt的表达情况与CD4+Foxp3+T细胞的浸润情况呈正相关关系(P<0.05)。[结论]CCR9、PD-L1在口腔鳞癌组织中的表达与口腔鳞状细胞癌颈淋巴结转移存在相关性,可能是口腔鳞状细胞癌发生颈淋巴结转移的重要因素之一;口腔鳞状细胞癌中CCR9的表达与CD4+Foxp3+T细胞的浸润相关,可能是造成口腔鳞状细胞癌免疫抑制状态形成的原因之一。