【摘 要】
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植物寄生线虫是重要的植物病原,造成许多经济作物的严重损失。淡紫拟青霉能广泛寄生于线虫卵,被认为是最具有应用前景的线虫生防真菌。几丁质酶在突破植物寄生线虫的角质层或
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植物寄生线虫是重要的植物病原,造成许多经济作物的严重损失。淡紫拟青霉能广泛寄生于线虫卵,被认为是最具有应用前景的线虫生防真菌。几丁质酶在突破植物寄生线虫的角质层或卵壳的过程中起重要作用。本课题采用几丁质琼脂平板培养与几丁质液体培养测定酶活相结合,从123 株淡紫拟青霉中筛选出一株产几丁质酶能力高的菌株FZ-0289 。体外致病性测定发现7d 后该菌株对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)卵的寄生率达95%以上,对甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)也有一定的寄生能力。通过单因素和多因素正交试验对淡紫拟青霉FZ-0289 产几丁质酶的条件进行了研究。通过单因素试验证明100 目几丁质粉末对菌体产几丁质酶的诱导性最强,同时添加蛋白胨能使产酶高峰提早,产酶量提高;多因素正交试验确定在添加2 g·L-1100 目几丁质粉末、2g·L-1蛋白胨、1 g·L-1 KH2PO4、0.5 g·L-1 MgSO4、0.2 g·L-1 CaCl2 和0.2 g·L-1 NaCl 的培养基中接入经马铃薯蔗糖培养基(PSA)活化10d 的菌碟,接菌孢子量为6×109 个·L-1,500mL 摇瓶中培养体积为150mL,在28℃、转速为150r·min-1 的条件下培养3d,发酵液中几丁质酶活达到0.11 U·mL-1。采用几丁质粉末亲和层析、离子交换两步从发酵液中纯化出几丁质酶E1,分子量为45.4KD。回收率3.4%,纯化28 倍,比活力为4.14U·mg-1。最适反应pH 为4、最适温度为35~45℃。pH4~6、40℃以下保持较高的稳定性。Hg2+在浓度为0.05mmol·L-1时就能对E1 的几丁质酶活产生强烈的抑制,Ag+和Cu2+在浓度为5mmol·L-1 时对酶活产生明显抑制作用,Fe2+对酶活有一定促进作用。
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