世界每年约有几十亿只日龄公雏由于不符合蛋鸡产业生产效益被大肆宰杀,这种做法不仅造成大量资源的浪费及成本的投入,还违反了动物福利的基本法则。如果能够在孵化期间无损鉴定出胚蛋的性别,不仅可以节约孵蛋的生产场地和投入成本,而且可以将不符合要求的胚蛋进一步的进行食品加工,提高产品的附加值。因此胚蛋无损性别鉴定直接影响着禽蛋业的生产效益和经济效益,而筛选出性别靶标物已成为当前亟待解决的难题,同时类固醇激素和胚蛋的性别分化紧密相关。因此,本文以鸡胚蛋作为研究模型,采用高效快速的ELISA法,对雌雄胚蛋不同孵化阶段多个部位的雄激素和雌激素进行了系统的研究,主要研究结果如下:(1)探究了胚蛋孵化2-7 d蛋黄胚液中类固醇激素的变化规律及性别差异,结果表明母体遗留分配给子代的六种类固醇激素中,E3含量最高,所占比例最大;孵化2-7 d期间E1、E2、E3、A4均呈现显著降低的趋势,而T和DHT整体上呈现增长的趋势。雌雄鸡胚蛋之间显著性性别差异主要表现在,雌雄之间E1%变化趋势不同,雌胚中E1%维持相对稳定,而在雄胚中则呈现递增的趋势;且在7 d时T、E1%、E2%和E3%均存在显著性性别差异;而A4和A4%在5 d时雄胚中含量显著高于雌胚;E2/E1和E3/E2在5 d时均存在性别差异。(2)探究了鸡胚蛋孵化8-13 d期间蛋黄胚液中激素变化规律及性别差异,结果表明胚蛋内雄激素的含量是显著高于雌激素,尤其是T激素,含量最高。孵化8-13d期间,E1、E3、T、A4、DHT整体上均呈现先下降后升高的趋势,大部分激素的变化趋势均在11d发生转折。性别差异主要表现在两个方面,第一,在孵化期某个时间点存在性别差异,如E1在11 d时存在显著性性别差异;DHT和A4含量均在9d时存在性别差异;第二,T/DHT和E3/E2在变化趋势上存在显著性的性别差异。T/DHT比值在雌胚中呈现显著降低的趋势,而雄胚中则在比值为8附近维持上下波动,无显著性变化。E3/E2在雌胚中显著升高,在雄胚中无显著性变化。在胚胎性腺分化阶段以匀浆混合液为样本检测胚蛋整体的激素变化并不能达到区分性别差异的目的。(3)探究了鸡胚蛋孵化8-16 d期间血清中激素变化规律及性别差异,结果表明孵化8-16 d期间血清中雄激素总量和雌激素总量均呈现显著上升的趋势,且雄激素含量显著高于雌激素,其中T激素含量最高,所占比例最大。E2、E3、T和A4随着孵化时间整体上均呈现增长的趋势;DHT呈现先减后增的趋势;E1在雄胚中逐渐增长,而在雌胚中略有下降。孵化8-16 d期间,雄胚血清中中雄激素总量显著高于雌胚,而雌激素总量显著低于雌胚,导致雄胚中含有更高比例的雄激素和较低比例的雌激素。E1、E2、E3、T、A4和DHT与性别显著相关;E1/A4、T/E2、E3/E1、E1/E2比值均与性别和年龄显著相关;均存在显著性性别差异。雌雄胚蛋血清中激素的性别差异在孵化后期表现得尤为明显,即性别分化对于激素的性别差异在后期更加显著。(4)探究了鸡胚蛋孵化8-16 d尿囊液和羊水中激素变化规律及性别差异,结果发现尿囊液和羊水中雄激素的含量显著高于雌激素,且T激素含量最高,所占比例最大;而E2含量最低。尿囊液和羊水中激素的变化趋势类似,T、DHT和A4三种雄激素均呈现降低的趋势,而E1、E2和E3三种雌激素均呈现升高的趋势,雌雄胚蛋尿囊液中六种性激素在含量上均无显著性性别差异,但雄胚尿囊液中E1、E2、E3增长率为雌胚的2倍,T、A4、DHT减少率比雌胚增加了约10%;且16 d时羊水中T激素占雄激素比例T%在雌胚中显著高于雄胚。推测血清、尿囊液和羊水中可能存在一定的调节作用,影响着三者之间激素的变化。(5)探究了孵化8-16 d期间胚蛋物理特征及小分子物质的变化规律及性别差异,结果表明孵化期间,鸡胚蛋失重和失重率均呈现增长的趋势。尿囊液体积在12d时达到最大值,后期体积逐渐减小;pH在14 d之前无明显变化,16 d时显著降低至7.5附近,维持弱碱性;渗透压由于尿酸盐结晶显著下降。羊水体积呈现逐渐增长的趋势,pH值持续降低,由弱碱性降至中性;渗透压显著升高,且羊水渗透压显著高于尿囊液渗透压。胚蛋的失重,尿囊液和羊水的体积、pH及渗透压等均无显著性性别差异。NMR实验解析出尿囊液中17种可能的物质,主要为无机酸、有机酸、氨基酸、胺类、糖类、盐类等小分子,但在性别之间均未发现显著性差异。