论文部分内容阅读
第一部分 以iTRAQ技术分析TCDD与维甲酸致胎鼠腭裂发生的共同差异表达蛋白质 目的：运用同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation;iTRAQ）技术结合质谱分析筛选2;3;7;8-四氯二苯二噁英（2;3;7;8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin;TCDD）与维甲酸致胎鼠腭裂发生的共同差异表达蛋白质。 方法：将36只孕鼠按照随机数表法随机分为3组;每组12只。分别以28μg/kg TCDD、80mg/kg 维甲酸在C57BL/6J孕鼠第10.5个妊娠日（gestational day10.5;GD10.5）灌胃;建立胎鼠腭裂模型;对照组给予等量玉米油灌胃。于GD17.5观察胎鼠腭部的解剖学及组织学改变;取 TCDD 组、维甲酸组与对照组 GD17.5 胎鼠的腭组织;从中提取总蛋白质;采用 iTRAQ 技术联合二维液相色谱-串联质谱(two-dimensional liquid chromatography/tandem mass spectrometry ;2D-LC-MS/MS)分析实验组与对照组差异表达蛋白质;采用生物信息学方法分析差异表达的蛋白质功能。 结果：（1）成功建立胎鼠腭裂模型。维甲酸组与TCDD组腭裂发生率分别为98.59%、97.14%（维甲酸组vs对照组：χ2=141.05;P＜0.05;TCDD组vs对照组：χ2=136.21;P＜0.05）;腭裂表型在形态学上相似。（2） 共鉴定出2 996个差异蛋白。维甲酸组、TCDD组与对照组比较;分别筛选出差异蛋白90个、75个;实验组共有差异表达蛋白18个。（3） 对 18 个差异蛋白进行 GO 分析发现;其主要参与类固醇激素应答反应、信号转导、调节细胞周期以及细胞增殖、凋亡等生物学过程;蛋白功能交互网图显示18个差异蛋白之间存在交互作用。 结论：运用iTRAQ技术能够快速、有效地筛选TCDD与维甲酸致C57BL/6J胎鼠腭裂发生的共同差异表达蛋白;发现的差异蛋白可能与TCDD、维甲酸致胎鼠腭裂的发生密切相关。 目的：探讨 C57BL/6J 孕鼠在 2;3;7;8-四氯二苯二噁英(2;3;7;8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin; TCDD)与维甲酸致胎鼠腭裂的最适诱导剂量下;腭突组织中Annexin A1和14-3-3 sigma 蛋白及mRNA的表达情况;并探讨其在腭裂发生中可能的作用机制。 方法：取30只C57BL/6J孕鼠;随机分为对照组（10只）、TCDD组（10只）和维甲酸组（10只）;TCDD组和维甲酸组于第10.5个妊娠日（gestational day10.5;GD10.5）分别以TCDD 28μg／kg、80mg／kg灌胃1次;对照组给予等量玉米油灌胃;于 GD17.5处死孕鼠;分别提取各组胎鼠腭突组织的总蛋白及总 RNA;利用 Western blot 和Q-PCR技术检测各组胎鼠Annexin A1、14-3-3 sigma蛋白及mRNA的表达水平。 结果：? Western blot结果显示;Annexin A1蛋白表达水平在维甲酸组、TCDD 组分别高于对照组（0.98±0.31vs0.52±0.11;P＜0.05;0.99±0.34vs0.52±0.11;P＜0.05）;14-3-3 sigma蛋白表达水平在两实验组均高于对照组（0.93±0.13vs0.55±0.15;P＜0.05;0.86±0.17vs0.55±0.15; P＜0.05）。? Q-PCR结果显示：TCDD组在GD17.5;Annexin A1和14-3-3 sigma mRNA水平明显高于对照组（Annexin A1 mRNA: 0.98± 0.29vs0.74±0.27; P＜0.05;14-3-3 sigma mRNA：1.33±0.40vs0.99±0.21; P＜0.05）;维甲酸组在GD17.5;Annexin A1和14-3-3 sigma mRNA水平与对照组比较无统计学差异（ Annexin A1 mRNA:0.88±0.29vs0.74 ±0.27;P＞0.05;14-3-3 sigma mRNA:1.05±0.18vs0.99±0.21;P＞0.05）。 结论：Annexin A1、14-3-3 sigma表达异常提示;该两个蛋白参与了TCDD及维甲酸致C57BL/6J胎鼠腭裂的发生;可能是TCDD及维甲酸致胎鼠腭裂发生的共同机制之一。