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目的:卵巢上皮性肿瘤是最常见的卵巢肿瘤,其恶性类型占卵巢恶性肿瘤的85%～95%,而卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤,死亡率居妇科肿瘤的首位。传统的三大治疗方法虽有一定进步,但因临床症状隐匿,早期诊断困难,晚期病人疗效不佳。目前卵巢癌的治疗仍难以令人满意。研究表明血管生成是实体肿瘤生长和转移的必备条件,而且与腹水生成有关。肿瘤和宿主组织均可产生多种血管生成因子,他们相互作用参与肿瘤血管形成的各个阶段。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是一种主要的血管生成因子,VEGF与其受体结合后,通过一系列信号转导途径促进肿瘤血管形成。目前,化疗仍是除手术治疗之外的重要治疗手段之一。研究发现,导致肿瘤化疗失败的原因之一是肿瘤对化疗药物的多药耐药。多药耐药是指由一种药物诱发,对该药耐药的同时,对其结构和作用机制无关的化疗药物产生交叉耐药。P-gp(P-glycoprotein)是多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1, MDR1)编码的一种跨膜转运蛋白,具有ATP酶活性,能将化疗药物从细胞内泵出,降低细胞内的有效药物浓度而致多药耐药。本文研究奥曲肽(octreotide, OCT)与顺铂单用及合用对体外培养的SKOV3卵巢癌细胞生长的影响及检测VEGF与P-gp的表达,初步揭示其在血管方面的作用机制及耐药性研究。探讨奥曲肽用于卵巢癌临床治疗的可行性。方法:1人卵巢癌细胞SKOV3的培养、传代以及生长曲线的测定。2体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay, MTT)比色法检测奥曲肽对该细胞增殖的抑制作用。3 MTT比色法检测奥曲肽与顺铂联合应用后对SKOV3细胞的抗增殖作用,采用金氏公式[1]分析相互作用指数(Interaction Index),评价两药联合应用后的作用,如相互作用指数>0.85表示相加作用,相互作用指数<0.85为拮抗作用。4倒置显微镜和H-E染色法观察细胞的形态学变化。5应用免疫细胞化学方法检测VEGF、P-gp的表达。6奥曲肽对人卵巢癌细胞SKOV3侵袭的影响。结果:1在无药物干预下,SKOV3细胞生长迅速,加入奥曲肽后细胞生长相对减慢,且随奥曲肽浓度增大,细胞生长曲线更趋低平。2 MTT比色法表明,奥曲肽能抑制人卵巢癌细胞SKOV3的体外生长,不同浓度的奥曲肽(0.1、0.5、1、5、10μg/ml)对SKOV3细胞的增殖均可产生抑制作用,且随浓度的增加,抑制作用逐渐增强,而且随着奥曲肽作用时间的延长,抑制作用也逐渐增强,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。即奥曲肽对SKOV3细胞增殖的抑制作用在一定的浓度范围内呈明显的时间-剂量依赖关系。3将奥曲肽与顺铂联合后发现对SKOV3细胞的增殖有明显的抑制作用,均大于奥曲肽或顺铂单用的效果。本文采用0.5、1、5μg/ml的奥曲肽与1.25、2.5、5μg/ml的顺铂联合应用,发现随着奥曲肽浓度的增大,其与顺铂的相加作用亦逐渐增强。金氏公式分析相互作用指数表明,0.5、1、5μg/ml的奥曲肽联合不同浓度的顺铂其相互作用指数均>0.85,说明两药合用后,其疗效具有相加的作用。4倒置显微镜下观察对照组SKOV3细胞贴壁生长良好,呈长梭形或菱形,透明,形态饱满,细胞增生活跃;而经奥曲肽作用48小时后的部分细胞不贴壁,皱缩,破裂,呈不规则形。经H-E染色后观察,对照组SKOV3细胞还可见细胞核染色均匀,而经药物作用后,SKOV3细胞出现形态变圆,体积缩小,胞质浓缩等现象。5免疫细胞化学结果显示,VEGF蛋白主要定位于细胞浆,呈棕黄色。对照组中,VEGF蛋白在SKOV3细胞浆中呈强表达;经药物处理48小时后,VEGF蛋白的染色明显减弱(P<0.05)。P-gp蛋白定位于胞浆与胞膜,呈棕褐色颗粒,在未用药的SKOV3细胞的细胞膜和胞浆中也呈阳性表达,经各浓度奥曲肽处理后,表达均减弱,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。6奥曲肽对人卵巢癌细胞SKOV3侵袭的影响,对照组穿膜细胞数为146个/400倍视野,经作用24小时后,浓度分别为5μg/ml和10μg/ml的奥曲肽的穿膜细胞数分别为82个/400倍视野和35个/400倍视野。结论:1奥曲肽对体外培养的人卵巢癌细胞SKOV3的生长有抑制作用,为卵巢癌的临床治疗提供了一种新的手段。2奥曲肽抑制SKOV3细胞增殖的作用在一定的浓度范围内呈明显的时间-剂量依赖关系。3奥曲肽和顺铂联合应用对人卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用增强,强于两者的单独应用,具有协同效应。4奥曲肽能使SKOV3细胞中VEGF蛋白表达下调,说明其抗肿瘤作用可能与其抑制肿瘤血管的形成有关。5奥曲肽能下调SKOV3细胞中P-gp蛋白的表达水平,说明可能与其对抗肿瘤细胞的耐药性有关。6奥曲肽随着其浓度的增加,抑制细胞的侵袭能力也逐渐增强。