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背景与目的:Th22细胞是CD4~+T细胞的其中一种亚型,主要通过分泌细胞因子IL-22参与机体的炎症反应,自身免疫性疾病和癌症等疾病或病理过程的发生或发展。因此,弄清楚调控Th22分化的机制至关重要。已有文献报道Notch信号通路的活化与T细胞的发育、分化紧密相关,参与调节Th1,Th2,Th17细胞和Treg细胞等的分化,本课题组前期研究证明Notch信号通路下游转录因子Hes-1高表达可以抑制Th22细胞的分化。Hsp90在T淋巴细胞白血病中可以起到稳定Notch分子胞内段NICD的作用,促进白血病的发生和发展,可能与刺激T细胞增殖有关。抑制Hsp90,NICD发生泛素化降解,其下游如Hes-1和c-myc等表达降低,提示Notch信号通路的信号传递受到Hsp90的影响。那么,Hsp90是否介导Notch信号调控naive CD4~+T细胞向Th22细胞分化?目前为止,还未见相关报道。因此,探明Hsp90在Notch信号通路调控Th22分化中的作用,可能丰富对Th22分化的认识,为相关疾病的治疗奠定理论基础。方法:取小鼠淋巴结,制备单细胞悬液,免疫磁珠分选技术分离naive CD4~+T细胞,通过anti-CD3、anti-CD28、IL-6和TNF-α等刺激培养,建立Th22细胞体外诱导分化模型。同时加入Jagged-1处理naive CD4~+T细胞,流式细胞术检测Th22细胞表型,qPCR和Western blot检测细胞的Hes-1和Hsp90的表达。然后,用Hsp90抑制剂SNX2112阻止或siRNA干扰Hsp90的表达,观察Th22细胞表型变化。Trizol法提取细胞总RNA,RT-PCR和qPCR检测处理细胞的il-22、hes-1、ahr和arnt在mRNA水平的变化;Western Bolt分析处理细胞的IL-22、Hes-1、AhR和ARNT在蛋白水平的表达差异;ELISA测定处理细胞培养上清中IL-4、IL-9、IL-10、IL-18、IL-21、IL-22、TNF-α、IFN-γ、TGF-β和IL-17A的表达水平;原位免疫荧光染色确定CD4~+T细胞中Hsp90和IL-22、Hes-1和AhR、Hes-1和IL-22、AhR和CCR6之间的表达关系。进一步用Hsp90激动剂GGA(Geranylgeranylacetone)刺激或转染Hsp90表达载体,同样方法检测和分析Th22细胞表型、信号分子、转录因子和细胞因子的变化。然后,CO-IP检测Hsp90和NICD之间的相互作用。最后,通过体内转染Hsp90过表达载体或siRNA,确定Hsp90能否发挥同样作用。结果:IL-6和TNF-α体外可显著诱导naive CD4~+T细胞向Th22细胞表型转化,Jagged-1激活Notch信号通路可抑制naive CD4~+T细胞向Th22细胞表型转化,此作用可被Anti-Jagged-1和DAPT逆转。SNX2112或敲低Hsp90可以促进naive CD4~+T细胞向Th22细胞表型转化,细胞的il-22,AhR,arnt表达上调,而Notch信号通路靶向转录因子Hes-1显著下调。与对照组比较,SNX2112或Hsp90-siRNA促进CD4~+T细胞生成IL-22,而Jagged-1则抑制IL-22的产生。相反,GGA或Hsp90过表达抑制CD4~+T细胞生成IL-22。不同浓度Jagged-1激活Notch信号或DAPT抑制Notch信号,导致Th22细胞表型下调或上调,但Hsp90的mRNA和蛋白水平并无改变;而抑制或促进Hsp90的表达则可以降低或增加Hes-1的水平。CO-IP显示Hsp90与Notch信号胞内段NICD存在相互作用。Hsp90体内过表达能抑制Th2细胞分化,敲低Hsp90可逆转该作用。结论:结果表明Jagged-1-Notch信号的活化能抑制naive CD4~+T细胞向Th22细胞分化,与Hsp90无明显关联。Hsp90分子的活化也能抑制Th22细胞的分化,与Notch信号通路的活化有关,且Hsp90与Notch受体胞内段NICD发生相互作用。结果提示,Hsp90可通过与NICD的结合介导Jagged-1-Notch信号抑制Th22细胞分化。