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褐飞虱(Nilaparvata lugens(St(a)l))是水稻(Oryza sativa L.)的重要害虫,它的发生和为害给水稻生产带来了巨大的经济损失。应用和推广抗性品种防治水稻褐飞虱已成为当前水稻综合治理的一个重要方面,水稻抗性品种的选育和推广是防治褐飞虱经济有效的措施。许多研究结果表明,水稻抗性品种的抗性与其体内的次生化合物密切相关。本文测定了芦竹碱对褐飞虱生物型Ⅱ的生物活性,研究了水稻不同品种在不同生育期的芦竹碱含量变化,分析了水稻中芦竹碱含量与水稻对褐飞虱抗性之间的关系。研究结果如下:
1.芦竹碱对褐飞虱的生物活性测定结果
(1)芦竹碱对褐飞虱的存活的影响:将芦竹碱加入人工饲料中饲养褐飞虱若虫,在芦竹碱25~300μg/ml(25μg/ml、50μg/ml、150μg/ml、300μg/ml)浓度处理中,150μg和300μg/ml浓度下,褐飞虱1、2龄若虫的死亡率与对照相比差异显著,以300μg/ml浓度下的死亡率最高,分别为61.57%和57.58%;在芦竹碱50~500μg/ml(50μg/ml、100μg/ml、250μg/ml、500μg/ml)浓度处理中,250μg/ml和500μg/ml浓度下,褐飞虱3~5龄若虫的死亡率与对照相比差异显著,以500μg/ml下的死亡率最高,分别为78.34%,64.78%和37.58%。
(2)芦竹碱对褐飞虱的取食的影响:在芦竹碱25~300μg/ml浓度处理中,150μg/ml和300μg/ml对褐飞虱1、2龄若虫的取食有明显抑制作用,300μg/ml的拒食作用最强,拒食率分别为73.585和69.12%;在芦竹碱50~500μg/ml浓度处理中,250μg/ml和500μg/ml对褐飞虱3~5龄若虫的取食有明显抑制作用,500μg/ml的拒食作用最强,拒食率分别为54.49%,50.54%和51.13%。
(3)芦竹碱对褐飞虱的生长发育的影响:在芦竹碱25~300μg/ml浓度处理中,300μg/ml浓度下,褐飞虱1、2龄若虫的发育历期与对照相比有显著差异,分别为3.8d和4.9d;在芦竹碱50~500μg/ml浓度处理中,250μg/ml和500μg/ml浓度下,褐飞虱3~5龄若虫的发育历期与对照相比有显著差异,500μg/ml浓度下,3~5龄若虫的发育历期分别为4.6d,4.6d和4.5d。
(4)芦竹碱对褐飞虱的羽化的影响:在芦竹碱50~500μg/ml浓度处理中,100μg/ml、250μg/ml和500μg/ml浓度下,褐飞虱若虫的平均羽化率分别为26.88%、17.78%和11.77%,与对照相比有显著差异。 2.水稻不同品种不同生育期对褐飞虱抗性的测定结果以TNl为感虫对照,含有抗虫基因Bph1的Mudgo、IR26对褐飞虱生物型Ⅱ的抗性级别均达8.63级以上,属于感虫品种,含有抗虫基因bph2的粳籼89、ASD7、IR36以及含有抗虫基因Bph3的IR56、Rathu Heenati的抗性级别均低于4.27级,属于抗虫品种。其中,以Rathu Heenati的抗性最强。各水稻品种分蘖期的抗性均比苗期的抗性强。
3.水稻不同品种不同生育期芦竹碱的分离鉴定与含量测定结果
经HPLC确定水稻TNl、Mudgo、IR26、粳籼89、ASD7、IR36、IR56、Rathu Heenati苗期和分蘖期的植株提取液中均含有芦竹碱。
(1)水稻不同品种苗期提取液中芦竹碱的含量:以TN1为对照,抗性水稻IR56、Rathu Heenati中芦竹碱的含量最高,分别为0.8026mg/g DW和0.8035mg/g DW;粳籼89、ASD7、IR36中芦竹碱的含量较高,分别为0.6703mg/g DW,0.7147mg/g DW和0.7231mg/g DW;感虫水稻Mudgo、IR26中芦竹碱的含量最低,分别为0.2020mg/gDW和0.4067mg/g DW。
(2)水稻不同品种分蘖期提取液中芦竹碱的含量:以TN1为对照,抗性水稻IR56、Rathu Heenati中芦竹碱的含量最高,分别为1.3839mg/g DW和1.3881mg/g DW;粳籼89、ASD7、IR36中芦竹碱的含量较高,分别为1.2077mg/g DW,1.2136mg/g DW和1.2237mg/g DW;感虫水稻Mudgo、IR26中芦竹碱的含量最低,分别为0.5772mg/gDW和0.5966mg/g DW。
4.水稻芦竹碱含量与水稻对褐飞虱抗性的回归分析
8个被测水稻品种在苗期、分蘖期的芦竹碱含量对水稻对褐飞虱生物型Ⅱ抗性的回归方程分别为:
y=-0.0901x+1.0897;Y=-0.1249x+1.6611式中y为芦竹碱含量(mg/g DW),x为抗性级别值。方程表明,水稻品种的芦竹碱含量增加将降低水稻对褐飞虱生物型Ⅱ的抗性级别值,即增强水稻的抗性。