【摘 要】
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目的:建立高表达RASSF1A人胃癌SGC-7901细胞株,为研究其在肿瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞、细胞增殖抑制等方面奠定基础。方法:采用RT-PCR从人胃组织中扩增出人RASSF1A基因的全
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目的:建立高表达RASSF1A人胃癌SGC-7901细胞株,为研究其在肿瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞、细胞增殖抑制等方面奠定基础。方法:采用RT-PCR从人胃组织中扩增出人RASSF1A基因的全长cDNA,利用DNA重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中获得重组质粒pcDNA3.1(+)/RASSF1A。利用脂质体将重组质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞株中,通过G418筛选阳性细胞克隆,采用RT-PCR、Western Blotting检测RASSF1A的表达。结果:1、酶切图谱分析及基因测序证明人RASSF1A基因已被完整、正确地插入到pcDNA3.1(+)质粒载体中;2、人胃癌SGC-7901细胞株的G418最佳筛选浓度为500μg/ml;3、RT-PCR及Western Blotting结果显示转染阳性质粒细胞的RASSF1A基因表达水平上调;结论:通过脂质体转染法能够成功获得稳定高表达RASSF1A基因的人胃癌SGC-7901细胞株;
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