【摘 要】
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目的:原发性肝细胞癌的死亡率位居癌症的第三位。化疗是治疗肝癌的最有效手段之一,但是化疗所伴随的免疫抑制限制了其治疗效果。本研究的目的是探讨双氢青蒿素改善顺铂治疗肝癌过程中伴随的免疫抑制微环境的效应及其机制。方法:（1）雄性BALB/c小鼠肝脏内多点注射小鼠腹水瘤细胞H22,构建肝原位移植瘤模型。造模成功后,将小鼠随机分为顺铂组和盐水组,顺铂组腹腔注射顺铂0.1m L,浓度为2mg/kg/d,隔天给
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81873112）； 河北省人才工程培养资助项目（A201902015）； 河北省高校百名优秀创新人才支持计划项目（SLRC2019043）；
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目的:原发性肝细胞癌的死亡率位居癌症的第三位。化疗是治疗肝癌的最有效手段之一,但是化疗所伴随的免疫抑制限制了其治疗效果。本研究的目的是探讨双氢青蒿素改善顺铂治疗肝癌过程中伴随的免疫抑制微环境的效应及其机制。方法:（1）雄性BALB/c小鼠肝脏内多点注射小鼠腹水瘤细胞H22,构建肝原位移植瘤模型。造模成功后,将小鼠随机分为顺铂组和盐水组,顺铂组腹腔注射顺铂0.1m L,浓度为2mg/kg/d,隔天给药,连续干预15d。盐水组腹腔注射0.9%生理盐水0.1m L。ELISA检测肝脏组织中PD-L1、IL-1β、CCL-2、IL-2、IL-4和TGF-β的表达水平。H＆E染色观察肝肿瘤组织病理改变情况。免疫组织化学染色检测肝脏组织YAP1分布及表达情况。（2）将浓度为2μM、5μM和10μM的顺铂分别处理人肝癌细胞Hep G2215以及5μM顺铂处理人肝癌细胞Hep G2 24h。然后,Western blot检测Hep G2215和Hep G2细胞YAP1蛋白表达水平。Real time RT-PCR技术检测Hep G2215细胞YAP1 m RNA表达水平。（3）慢病毒转染并筛选敲低YAP1基因Hep G2215细胞,并用5μM顺铂处理sh YAP1 Hep G2215细胞24h,然后Western blot检测YAP1蛋白表达水平。（4）利用雄性C57BL/6小鼠经DEN/TCPOBOP联合化学诱导法制备小鼠原位肝癌模型。经小动物B超检测,建模成功后,将小鼠随机分为对照组、verteporfin组和双氢青蒿素组。Verteporfin组小鼠腹腔注射verteporfin浓度为100 mg/kg,双氢青蒿素组小鼠腹腔注射双氢青蒿素浓度为25mg/kg,对照组注射生理盐水稀释的DMSO 0.1m L/d。干预25d后,用小动物B超检测用药前后肝脏肿瘤大小的变化。ELISA检测肝脏肿瘤组织和癌旁组织的PD-L1;肿瘤、癌旁及血清中的IL-1β、CCL-2、IL-2、IL-4和TGF-β的表达水平。免疫组织化学法染色检测肝脏组织YAP1的分布和表达情况。（5）双氢青蒿素（21.5μM）和氯喹（50μM）分别处理Hep G2215细胞24h,Western blot检测LC3B和p62蛋白表达水平,并用透射电镜观察自噬小体形态。结果:1.顺铂提高了肝脏原位移植瘤小鼠H22细胞中YAP1的表达水平（P＜0.05）,提高了PD-L1、IL-1β和CCL-2在肝脏肿瘤微环境中的表达水平（P＜0.05）。2.顺铂提高了Hep G2、Hep G2215和sh YAP1Hep G2215细胞中YAP1的表达水平（P＜0.05）。3.YAP1抑制剂verteporfin降低了原位肝癌小鼠肿瘤组织中PD-L1的表达水平（P＜0.05）。4.双氢青蒿素抑制了原位肝癌小鼠肿瘤组织中YAP1的表达（P＜0.05）。5.双氢青蒿素促进Hep G2215细胞中LC3B-II的表达,抑制p62的表达（P＜0.05）,增加了自噬小体的数量（P＜0.05）。结论:1.顺铂通过提高YAP1的表达,促进肝癌局部免疫抑制微环境的形成;2.YAP1抑制剂verteporfin降低肝癌组织PD-L1表达,改善免疫抑制微环境,抑制肝脏肿瘤的生长;3.双氢青蒿素促进肝癌细胞自噬,降低肝癌组织YAP1的表达水平。
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