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目的：肢带型肌营养不良(limb girdle muscular dystrophy, LGMD)是一组具有遗传和临床异质性的疾病,可为常染色体显性(1型)、隐性(2型)遗传,散发病例亦不少见,发病率约为1/10万,由Walton和Nattrass于1954年首先提出,用以区别DMD、面肩肱型等已知的肌营养不良。根据受累基因的不同LGMD1分为LGMD1A～LGMD1G七种类型,LGMD2又分为LGMD2A～LGMD2L十二种类型(表格1,Neuromuscular Home Page of WU.url)。临床上病变主要累及上、下肢带肌,或以肢带肌首先受累,逐渐出现全身肌肉的无力和萎缩。LGMD无特征性病理改变,各亚型之间单纯以肌活体组织检查病理结果难以鉴别。突变基因和缺失蛋白分析是确诊LGMD各亚型的必要手段。LGMD2A由常染色体15q15.1-q21.1上的CAPN-3基因突变导致其表达产物——骨骼肌特异性钙激活蛋白酶-3(即calpain-3)活性异常所致,LGMD2B是由位于2p13的DYSF基因发生突变引起相应的基因产物dysferlin表达异常导致。本研究选取37例临床病理诊断为肢带型肌营养不良的病人,利用免疫学方法检测病人肌肉中caveoiln-3、calpain-3、dysferlin、sarcoglycan的表达,进一步探讨我国LGMD2A的临床和病理特点,借以对各型肌营养不良进行鉴别。材料和方法：选取山东大学齐鲁医院神经肌肉病研究室接诊的37例临床和病理诊断为肢带型肌营养不良病人的肌肉标本,其中肢带型肌营养不良2B(LGMD2B)7例。另选病理报告为正常的肌肉标本5例作为对照。经液氮预冷的异戊烷中速冻的冰冻肌肉标本制成5μm冰冻切片,用抗dystrophin C-terminal、dystrophin Rod、dystrophin N-terminal、caveolin-3、、α-、β-、γ-、δ-sarcoglycan和dysferlin蛋白的9种单克隆抗体做免疫组织化学染色(IHC),对7例LGMD2B型和排除LGMD2B型之后的30例分型未明的LGMD患者的冰冻肌肉标本,分别提取肌组织总蛋白行calpain-3和dysferlin蛋白印迹分析(western blot,WB)。结果：IHC与WB分析结果：对其中7例肢带型肌营养不良2B(LGMD2B)患者的冰冻组织,进行IHC发现患者dystrophin、caveolin-3和α-、β-、γ-、δ-sarcoglycan免疫组织化学染色均正常,提取肌肉组织总蛋白并测定提取液蛋白浓度后,进一步作WB分析,定量检测calpain-3发现有2例calpain-3条带表达呈不同程度的降低,可能为继发的calpain-3减少。在排除LGMD2B型(7例)之后的30例分型未明的LGMD患者的冰冻组织中,经IHC发现患者dystrophin、caveolin-3和α-、β-、γ-、δ-sarcoglycan免疫组织化学染色均正常,6例dysferlin染色减低。对30例分型未明的LGMD患者肌肉标本,提取肌肉组织总蛋白并测定提取液蛋白浓度后行WB分析,定量检测calpain-3和dysferlin。有5例calpain-3蛋白条带缺失或遗留痕迹,从而被确诊为钙蛋白酶肌病,即LGMD2A。以上5例病人IHC显示dystrophin、caveolin-3和α-、β-、γ-、δ-sarcoglycan免疫组织化学染色均正常,2例dysferlin染色减低。其余病人的calpain-3条带表达呈不同程度的降低,有10例calpain-3条带表达在正常对照值的45%以上,8例病人calpain-3表达在正常对照值的20%-45%,5例病人<10%,calpain-3条带明显减弱但轮廓仍清晰,以上可能与继发的calpain-3减少有关。2例calpain-3表达正常。6例dysferlin染色减低的患者肌肉标本WB结果在正常对照值的30%以上,认为不属于原发性dysferlinopathy,可能为继发性减少。结论：1.本组5例LGMD2A,占全部LGMD的13.5%(5/37),低于文献报道LGMD2A患者占总LGMD的约26%的平均水平。2.本研究在对calpian-3的免疫学检测中运用了WB方法,以补充calpian-3不能用于IHC的辅助诊断。结果发现5例病人calpian-3完全缺失。有2例病人在IHC观察为dysferlin表达减弱,而在WB分析发现正常。鉴于WB结果的可靠性,我们认为对于LGMD各型的诊断,首先行IHC进行排除性筛检,进一步行WB分析,以获得可靠的诊断结果。3. LGMD肌肉病理表现为不同程度的肌营养不良性改变,没有特异性,往往需要进一步的分子生物学检查。用免疫组织化学标示肌纤维膜上的dystrophin、caveolin-3、dysferlin和α-、β-、γ-、δ-sarcoglycan,对有染色缺陷的可疑病例和不能用于IHC的calpain-3蛋白用WB方法证实骨骼肌组织相关蛋白的缺乏,是诊断与鉴别诊断LGMD各型的有效方法。