四川地区部分动物源绿脓杆菌质粒介导ESBLs和AmpC酶耐药基因检测

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绿脓杆菌是临床与生产上一种极为常见的条件致病菌,并且拥有复杂的耐药机制。随着抗生素的滥用,使耐药菌得以选择性地进化发展,多重耐药菌株的出现导致绿脓杆菌的耐药性问题日渐严重,严重威胁人类与动物的健康。对四川地区部分动物源绿脓杆菌进行耐药性监测和其质粒介导的ESBLs、AmpC酶基因研究,为指导兽医临床合理用药提供依据。本次研究是以2013~2016年从四川部分地区兽医临床及生产上分离得到的233株动物源绿脓杆菌分离菌为实验对象,测定了其对14种抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示,受试菌株对导β-内酰胺类抗菌药物有极强的耐药性,对氨苄西林、头孢噻肟及头孢西丁的耐药率均为100%,对其余抗菌药物的耐药率依次为复方新诺明97.85%、头孢曲松93.99%、氨曲南93.13%、亚胺培南80.69%、头孢吡肟57.51%、头孢他啶49.36%、环丙沙星15.02%、庆大霉素12.45%、左氧氟沙星12.45%、多粘菌素B 9.87%、阿米卡星3.43%。MDP-PA占所有菌株的79.83%,受试菌株以7~9耐为主。β-内酰胺类抗菌药物间存在着严重的交叉耐药性,头孢他啶对β-内酰胺类抗菌药物的交叉耐药性最低,交叉耐药率范围在49.36~68.66%间;而β-内酰胺类抗菌药物与非β-内酰胺类抗菌药物之间也存在着一定的交叉耐药性,除复方新诺明对β-内酰胺类抗菌药物的交叉耐药率极高外,其余非药物对β-内酰胺类抗菌药物交叉耐药率范围在3.43~20.90%间。对受试菌株产ESBLs、AmpC及MBL酶检测结果显示,所有绿脓杆菌分离菌均检测出产ESBLs及AmpC酶,未检测出MBL,采用PCR技术对所有受试菌株进行22种相关耐药基因进行检测,结果显示,所有菌株都扩增出质粒ESBLs酶耐药基因,14株扩增出质粒AmpC酶耐药基因,未检测出MBL耐药基因。其中,所有受试菌株都携带了TEM-116基因,118株携带OXA-1型,28株携带OXA-10型,21株携带了CTX-M-15,14株携带了DHA-1型。88株受试菌株只携带了一种耐药基因(TEM),145株携带了2种级以上耐药基因,携带多耐药基因的菌株耐药性强于单耐药基因菌株。利用Eric-PCR对绿脓杆菌分离菌进行同源性分析,结果表明这些地区绿脓杆菌分为30个基因型。在233株受试菌株中,成功获得41株结合子,接合率17.60%,ESBLs酶耐药基因成功转移,未检测出携带AmpC酶基因的结合子。利用微量肉汤稀释法及PCR技术对接合子进行MIC值测定和相关耐药基因的检测,结果表明存在质粒的ESBLs酶基因是可以通过接合转移方式发生横向传递的,β-内酰胺类抗菌药物的耐药性也随之得到转移,导致多药细菌的产生及传播。
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